免疫組織化学（IHC）｜染色および解析サービス

Q: バイオスペクティブでは、どのような対比染色剤を使用していますか？

当チームが数年前に開発した対比染色剤「Acid Blue 129」（Zehntner, 2008）を使用しております。この染色剤は均一な淡青色の背景色を持ち、赤褐色の発色剤との優れたコントラストを提供します。画像のセグメンテーションや定量分析に非常に適しております。

Q: バイオスペクティブ社ではどの発色剤を使用していますか？

当施設では免疫組織化学（IHC）研究に通常AEC染色法を採用しております。この発色剤は鮮明で強い赤褐色を発色し、DAB染色法に伴う毒性がありません。

Q: 私の研究のために、新しい抗体の検証を行っていただけますでしょうか ？

はい。当社の研究開発チームでは 、新規抗体の 検証を定期的に 行っております 。 最適な 希釈率、回収法、検出条件を調整し、確固たる再現性のある染色結果を確保しております。

Q: 盲検化された定量分析を実施していただけますでしょうか？

もちろんです。ご要望に応じて、すべての定量分析は盲検化条件下で実施することが可能です。これによりバイアスを最小限に抑え、データの完全性を確保いたします。

Q: アミロイドβとプルシアンブルーを併用染色し、微小出血を検出することは可能でしょうか？

はい、三重染色が可能です：アミロイドβプラークはDAB染色（茶色）で可視化され、微小出血はプルシアンブルー染色（青色）で可視化され、組織は対比のためエオシン染色（ピンク色）で対比染色されます。

Q: MC1とAT8はどのように異なりますか？

MC1抗体とAT8抗体の両方がタウタンパク質に結合しますが、MC1抗体は構造特異的な異常折り畳みタウを認識 するのに対し、 AT8抗体は過リン酸化タウに関連するリン酸化特異的エピトープを検出します。

Q: どのマーカーを勉強に使用すべきか、どのように選べばよろしいでしょうか？

マーカーの選択は、 生物学的課題、 組織タイプ、 および動物モデルによって異なります 。確立されたマーカーを使用することも、お客様専用の抗体で対応することも可能です。一般的に使用されるマーカーの例としては、以下のものが挙げられます： グリア化／炎症： GFAP（アストロサイト）、Iba1（ミクログリア／マクロファージ） 神経細胞の健全性／喪失： NeuN（神経細胞核） タンパク質凝集／病理： pSyn（リン酸化α-シヌクレイン）、pTDP-43、AT8、MC1、アミロイドβ

CROサービス

免疫組織化学（IHC）－組織染色および定量的画像解析サービス

バイオスペクティブでは、脳、脊髄、筋肉および末梢神経組織切片の高品質な免疫組織化学（IHC）染色、スライドスキャン、ならびに画像解析サービスを提供しております。

ご連絡ください

当社の免疫組織化学（IHC）サービス

プレクリニカルCROとして、当社は以下の機関向けに免疫組織化学染色および解析の受託研究サービスを提供しております：

学術研究所・研究センター
バイオテクノロジー企業
製薬業界

当社は以下の分野におけるリーダーです：

免疫組織化学染色
スライド全体のスキャン
デジタル化組織切片の定量的画像解析

当チームは数十年にわたり以下の分野で豊富な経験を有しております：

脳
脊髄
筋肉
末梢神経
神経節

マウス脳におけるニューン（NeuN）の免疫組織化学染色。
成体マウス脳のFFPE切片における代表的な冠状断面。発色性AEC検出法を用いてニューン（NeuN）を染色しています。この染色法により、神経細胞密度、皮質構造、領域別神経細胞分布、および疾患関連神経変性の評価が可能です。

当研究所では、最先端の自動免疫組織化学染色装置および高スループット全スライドスキャナーを導入し、品質の最大化と納期短縮を実現しております。

自社研究や他社との共同動物モデル研究において組織を採取された場合、染色・スライドスキャン・ 画像解析 のため、当施設へご送付いただくことが可能です 。

神経疾患マウスモデルにおける免疫組織化学（IHC）研究の事例

バイオスペクティブでは、筋萎縮性側索硬化症（ ALS）、アルツハイマー病およびタウ病変、パーキンソン病、ならびに多発性硬化症（MS）のマウスモデルを用いた研究を日常的に実施しております。ここでは、これらのモデルにおける当社の免疫組織化学（IHC）染色の代表的な例をいくつかご紹介いたします。また、提供されているリンクから、これらのモデルに対する当社のIHCサービスについてさらに詳しくご覧いただけます。

ALSモデル|ADモデル|PDモデル|MSモデル

筋萎縮性側索硬化症（ALS）マウスモデルにおける免疫組織化学染色

リン酸化（p409/410）TDP-43の染色結果（Biospective社「Low Dox」rNLS8マウス）。
バイオスペクティブ社の「低ドキソルビシン」TDP-43ΔNLS（rNLS8）マウスモデル由来の脳組織切片の高倍率像です。リン酸化TDP-43（p409/410）を、酸性ブルー129による対比染色を伴うAEC発色検出法で染色したものです（Zehntner, 2008）。

これらのALSモデルにおいて、当研究室では脳および脊髄を定期的に以下の染色処理を行っております：

ヒトTDP-43
リン酸化TDP-43（pTDP-43）
GFAP（星状細胞）
Iba1（ミクログリア）
ATP5A（ミトコンドリア）
脊髄運動ニューロン（ChAT）

当チームはALSモデル向けの堅牢な画像解析技術を開発いたしました：

「低ドキソルビシン」TDP-43ΔNLS ALSマウスモデルの脳切片における多重免疫蛍光法に関するインタラクティブプレゼンテーションをご覧ください。
また、マルチプレックス免疫蛍光法（mIF）を用いて筋内の神経筋接合部（NMJ）を染色することも可能です。詳細は「ALSモデルマウスにおける神経筋接合部（NMJ）の脱神経」と題したインタラクティブ画像をご覧ください。

TDP-43モデルおよび／またはその他のALSモデル（例：SOD1、C9orf72、PFN1）の脳、脊髄、筋肉、その他の組織をお持ちでしたら、喜んで共同研究させていただきます。

また、免疫組織化学染色（IHC）を補完するため、血液や脳脊髄液（CSF）からの液体バイオマーカーも提供可能です。例えば：

ニューロフィラメント軽鎖（NF-L）
TDP-43
GFAP
サイトカイン（例： IL-1β、TNF-α）
ケモカイン
PSD-95

これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。

アルツハイマー病およびタウ病変マウスモデルにおける免疫組織化学染色

アルツハイマー病およびタウ病変のマウスモデルにおける脳内のアミロイドβおよびタウ染色。
（左）9ヶ月齢のAPP/PS1トランスジェニックマウスの脳の高倍率像。線維状アミロイドβ染色により、 Aβ斑 および脳アミロイド血管症（CAA）が確認されます。
（右）PS19（P301S）トランスジェニックマウス脳の高倍率像。タウ既成線維（PFF）注入後3ヶ月経過。局所的なAT8陽性タウ凝集体とその影響を受けた脳構造内での分布が確認できます。

これらのアルツハイマー病およびタウ病変モデルにおいて、当研究室では脳組織に対し以下の染色を定期的に実施しております：

βアミロイド（各種Aβ抗体）
リン酸化タウ（AT8）
構造変化タウ（MC1）
GFAP（星状細胞）
Iba1（ミクログリア）
ニューン（ニューロン）
ASC（インフlammasome）

当チームはアルツハイマー病モデル向けの堅牢な画像解析技術を開発いたしました。具体的には以下の内容を含みます：

アミロイド斑の特性評価（例：サイズ、タイプ［緻密型、拡散型、線維状］、個数）；詳細はリソース「アルツハイマー病におけるアミロイドβ斑分析」をご参照ください
炎症性微小環境解析；詳細は当社のイノベーション：APP/PS1アルツハイマー病マウスモデルにおけるアミロイドβと炎症性微小環境をご参照ください
反応性アストロサイト解析；詳細は当社のイノベーション「アルツハイマー病マウスモデルにおけるアストロサイトとアミロイドβ」をご参照ください

併せて、インタラクティブプレゼンテーション「アルツハイマー病（AD）およびADマウスモデルにおける神経変性を促進するのはアミロイドβではなくタウである」もご覧ください。

APP/PS1マウス、その他のアルツハイマー病モデルマウス・ラット、あるいはタウ病変モデル（例： 5xFADマウス、PS19マウス、APP KIマウス・ラット、JNPL3マウス、rTg4510マウス）の脳組織その他の組織をお持ちでしたら、ぜひご提供ください。

また、免疫組織化学染色（IHC）を補完するため、血液・脳脊髄液（CSF）または脳ホモジネート上清からの体液性バイオマーカーも提供可能です。例：

ニューロフィラメント軽鎖（NF-L）
Aβ40 および Aβ42
総タウおよびリン酸化タウ
GFAP
サイトカイン（例： IL-1β、TNF-α）
ケモカイン
APOE4
PSD-95

これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。

パーキンソン病マウスモデルにおける免疫組織化学染色

pSyn染色を伴うPFF注入M83マウス脳
パーキンソン病モデルマウス（Biospective 社開発のα-シヌクレインPFF播種・拡散モデル）におけるpSyn129染色の高倍率像。影響を受けた神経細胞内に局所的に蓄積した、高密度のpSyn陽性凝集体が確認できます。

これらのパーキンソン病モデルにおいて、当研究室では脳組織の染色を定期的に実施しております：

リン酸化α-シヌクレイン（pSyn129）
GFAP（星状細胞）
Iba1（ミクログリア）
ニューン（ニューロン）
チロシン水酸化酵素（ドーパミン作動性ニューロン）

当チームは、パーキンソン病モデルに対する堅牢な画像解析技術を開発いたしました。具体的には以下のモデルが含まれます：

活性化ミクログリア；詳細は当チームのイノベーション：パーキンソン病モデルマウスにおけるα-シヌクレインPFFによるミクログリア活性化をご参照ください

パーキンソン病のモデルとして、α-シヌクレインおよび／またはその他のトランスジェニック、ノックイン、ノックアウト、ヒト化、あるいは誘導性毒素（例：6-OHDA、MPTP、ロテノン）を表現するマウスまたはラットの脳組織をお持ちでしたら、喜んで共同研究を承ります。

また、免疫組織化学染色（IHC）を補完するため、血液・脳脊髄液（CSF）または脳ホモジネート上清からの液体バイオマーカーも提供可能です。例：

ニューロフィラメント軽鎖（NF-L）［当リソース「パーキンソン病モデルにおけるニューロフィラメント軽鎖」もご参照ください］
GFAP
サイトカイン（例： IL-1β、TNF-α）
ケモカイン
PSD-95

これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。

多発性硬化症マウスモデルにおける免疫組織化学染色

明視野免疫組織化学法による脱髄および神経炎症モデルにおけるミエリン塩基タンパク質（MBP）とIBA1の発現解析

脱髄/再髄鞘化および自己免疫性炎症モデルにおけるMBPおよびIba1染色
(左) 脱髄および再髄鞘化を模したクプリゾンマウスモデルのマウス脳の代表的な冠状断面。ミエリン塩基性タンパク質（MBP）染色を実施。スライド全体を明視野で撮影することで、ミエリンの完全性および脱髄・再髄鞘化の局所パターンを可視化できます。
（右）自己免疫性脱髄を模した実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）マウスモデルにおける脊髄の代表的な横断面。活性化ミクログリアおよび浸潤マクロファージを検出するためIba1で染色されています。

これらの多発性硬化症（MS）モデルにおいて、当研究室では脳および脊髄に対し、以下の染色を定期的に実施しております：

MBP、MOG、またはPLP（ミエリン）
GFAP（星状細胞）
Iba1（小膠細胞およびマクロファージ）
CD3（T細胞）
成熟オリゴデンドロサイト
オリゴデンドロサイト前駆細胞（OPC）マーカー
軸索損傷マーカー

当チームは、多発性硬化症モデル向けの堅牢な画像解析技術を開発いたしました。具体的には以下の内容を含みます：

軸索損傷・障害マーカー；詳細はリソース「実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）と軸索損傷」をご参照ください

また、免疫組織化学染色を補完するため、血液や脳脊髄液、あるいは脳ホモジネート上清からの液体バイオマーカーを用いることも可能です。例えば：

ニューロフィラメント軽鎖（NF-L）［関連リソース「実験的自己免疫性脳脊髄炎および軸索損傷」もご参照ください］
GFAP
サイトカイン（例： IL-1β、TNF-α）
ケモカイン
PSD-95

これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。

EAE、クプリゾン、および／またはその他のマウスやラットを用いた多発性硬化症モデル（例：LPC）由来の脳、脊髄、その他の組織をお持ちでしたら、喜んで共同研究させていただきます。

神経疾患モデルにおける免疫組織化学染色の概要

モデル／疾患	主要な免疫組織化学マーカー	代表的な読出結果	関連するエンドポイントおよびサービス
ALS	TDP-43、pTDP-43、GFAP、Iba1、ChAT	TDP-43病理、神経炎症、神経変性	運動機能、筋力、筋電図、CT筋萎縮、MRI脳萎縮、血液・髄液NF-L、神経筋接合部（NMJ）解析
アルツハイマー病およびタウ病変	Aβ、pTau（AT8）、MC1、GFAP、Iba1	プラーク負荷、タウ凝集体、ミクログリア増生、アストロサイト増生	アミロイド微小環境解析、MRI脳萎縮、体液バイオマーカー
パーキンソン病	pSyn129、TH、GFAP、Iba1、NeuN	pSyn負荷、ドーパミン作動性ニューロン喪失、神経炎症、神経変性	睡眠、運動機能、MRI脳萎縮、血液および脳脊髄液NF-L
多発性硬化症	MBP/MOG/PLP、Iba1、GFAP、CD3	脱髄／再髄鞘化、軸索損傷、神経炎症、末梢炎症浸潤	臨床スコア（例：EAE スコア）、組織・体液サイトカイン分析、MRI（MTR分析）、血液・脳脊髄液NF-L

本表は、ALS、アルツハイマー病およびタウ病変、パーキンソン病、ならびに多発性硬化症モデルにおける主要な免疫組織化学マーカー、代表的な測定結果、関連するエンドポイントおよびサービスの概要を示しております。

免疫組織化学（IHC）とは何でしょうか？

免疫組織化学（IHC）は、前臨床神経科学研究における重要な技術であり、組織内の特定のタンパク質を可視化および定量化することを可能にします。様々なレポーターシステムで標識された抗体を使用することで、 IHCはタンパク質の局在、発現レベル、細胞内分布をマッピングします（Velasco-Vales, 2022;Mebratie, 2024）。神経変性疾患の研究においては、タンパク質の異常折り畳み、神経炎症、神経細胞の喪失、シナプス機能障害、回路病理を特徴づけるためにIHCは不可欠であり、疾患の進行評価や治療介入の支援に役立っています。

マウス黒質におけるドーパミン作動性細胞体および突起（左）ならびに神経細胞核（右）の免疫組織化学（IHC）染色。

バイオスペクティブでは、当社の研究所では 複数の自動免疫組織化学／免疫蛍光染色装置を活用し、以下の点を保証しております：

高い再現性
低い変動性
迅速な結果提供
大規模コホート全体での最適な一貫性

神経疾患のげっ歯類モデル向けに十分に検証済みのIHCパネルを維持しており、お客様の研究ニーズに合わせたカスタム染色プロトコルの開発も可能です。経験豊富な科学者と技術者からなる専任の研究開発チームが、再現性、感度、高品質な定量分析を最適化したプロトコルを保証いたします。

IHCとIFの違いは何でしょうか？

特徴	免疫組織化学（IHC）	免疫蛍光法（IF）
多重化	限定的（1～2マーカー）	高（複数の蛍光色素）
検出	酵素ベースの発色反応	蛍光発光
可視化	明視野	広視野蛍光顕微鏡 / 共焦点顕微鏡
染色剤	DAB、AEC、ファストレッド	FITC、TRITC、アレクサ・フロール、DAPI
信号	永続的	光退色しやすい
定量	半定量的	高度に定量的
背景	低い	自家蛍光の可能性あり
感度	中程度	高
検体	FFPEまたは凍結組織	FFPEおよび凍結組織；培養細胞
出力	比色	蛍光

免疫組織化学（IHC）と免疫蛍光法（IF）の特性を、マルチプレクシング、検出、可視化、染色剤、シグナル、定量化、バックグラウンド、感度、サンプル、出力といった主要な基準で比較いたします。

当社の免疫組織化学（IHC）サービスについて、さらに詳しくお知りになりたい場合は

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よくあるご質問

バイオスペクティブでは、どのような対比染色剤を使用していますか？

バイオスペクティブ社ではどの発色剤を使用していますか？

バイオスペクティブ社では、どのような抗原回収法を採用しておりますか？

抗原回収法は、実際のところ特定の染色法や抗体によって異なります。例えば、リン酸化α-シヌクレインの場合はプロテイナーゼKによる前処理を用います。β-アミロイドの場合はギ酸による前処理を用います。多くの染色法では、様々な緩衝液を用いた熱誘導エピトープ回収法（HIER）を採用しております。

私の研究のために、新しい抗体の検証を行っていただけますでしょうか？

盲検化された定量分析を実施していただけますでしょうか？

アミロイドβとプルシアンブルーを併用染色し、微小出血を検出することは可能でしょうか？

MC1とAT8はどのように異なりますか？

どのマーカーを勉強に使用すべきか、どのように選べばよろしいでしょうか？

参考文献

キーワード

免疫組織化学（IHC）－組織染色および定量的画像解析サービス