Immunohistochimie (IHC) | Services de coloration et d'analyse

Q: Quel contre-colorant Biospective utilise-t-il ?

Nous utilisons un contre-colorant, appelé Acid Blue 129, développé par notre équipe il y a plusieurs années (Zehntner, 2008). Ce colorant présente un fond bleu clair homogène qui offre un excellent contraste avec le chromogène rouge-brun et convient parfaitement à la segmentation d'images et à l'analyse quantitative.

Q: Quel chromogène Biospective utilise-t-il ?

Nous utilisons généralement l'AEC pour nos études IHC. Ce chromogène offre une couleur rouge-brun vive et intense et ne présente pas la toxicité associée au DAB.

Q: Pourriez-vous valider de nouveaux anticorps pour mon étude ?

Oui. Notre équipe de recherche et développement validerégulièrement de nouveaux anticorps, en optimisant les conditions de dilution, de récupération et de détection afin de garantir une coloration fiable et reproductible.

Q: Êtes-vous en mesure d'effectuer une analyse quantitative en aveugle ?

Tout à fait. Toutes les analyses quantitatives peuvent être réalisées en aveugle sur demande afin de minimiser les biais et de garantir l'intégrité des données.

Q: Est-il possible de co-marquer l'amyloïde-β avec du bleu de Prusse afin de détecter des microhémorragies ?

Oui, nous pouvons réaliser une triple coloration : les plaques amyloïdes β peuvent être visualisées avec du DAB (brun), les microhémorragies avec du bleu de Prusse (bleu) et les tissus contre-colorés à l'éosine (rose) pour le contraste.

Q: En quoi le MC1 diffère-t-il de l'AT8 ?

Les anticorps MC1 et AT8 se lient tous deux à la protéine Tau ; cependant, MC1 reconnaît une forme mal repliée de Tau spécifique à une conformation, tandis que AT8 détecte des épitopes spécifiques à la phosphorylation associés à la protéine Tau hyperphosphorylée.

Q: Comment dois-je sélectionner les marqueurs à utiliser pour mes études ?

Le choix des marqueurs dépend de votre question biologique, du type de tissu etdu modèle animal . Nous pouvons utiliser des marqueurs bien établis ou travailler avec vos anticorps personnalisés. Voici quelques exemples de marqueurs couramment utilisés : Gliose / Inflammation : GFAP (astrocytes), Iba1 (microglies/macrophages) Santé/perte neuronale : NeuN (noyaux neuronaux) Agrégation protéique / pathologie : pSyn (α-synucléine phosphorylée), pTDP-43, AT8, MC1,bêta-amyloïde

Services CRO

Immunohistochimie (IHC) – Services de coloration tissulaire et d'analyse quantitative d'images

Biospective propose des services de coloration IHC de haute qualité, de numérisation de lames et d'analyse d'images de coupes de tissus cérébraux, médullaires, musculaires et nerveux périphériques.

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Nos services d'immunohistochimie (IHC)

En tant qu'organisme de recherche sous contrat préclinique, nous fournissons des services de recherche sous contrat pour la coloration et l'analyse immunohistochimiques aux laboratoires universitaires et aux centres de recherche suivants :

Laboratoires universitaires et centres de recherche
Les entreprises de biotechnologie
L'industrie pharmaceutique

Nous sommes leaders dans les domaines suivants :

Coloration IHC
Numérisation de lames entières
Analyse quantitative d'images de coupes tissulaires numérisées

Notre équipe possède plusieurs décennies d'expérience dans les domaines suivants :

Cerveaux
La moelle épinière
Muscles
Nerfs périphériques
Ganglions

Image IHC de NeuN dans le cerveau de souris

Coloration IHC de NeuN dans le cerveau de souris.
Coupe coronale représentative d'une coupe FFPE de cerveau de souris adulte colorée pour NeuN à l'aide d 'une détection chromogénique AEC. Cette coloration permet d'évaluer la densité neuronale, l'architecture corticale, la distribution régionale des neurones et la neurodégénérescence liée à la maladie.

Nos laboratoires sont équipés d'instruments automatisés de coloration IHC/IF à la pointe de la technologie et de scanners à haut débit pour l'ensemble des lames, afin d'optimiser la qualité et de réduire les délais d'exécution.

Si vous prélevez des tissus dans le cadre de vos études internes ou d'études sur des modèles animaux réalisées avec un autre fournisseur, vous pouvez simplement nous les envoyer pour la coloration, la numérisation des lames et l'analyse des images .

Exemples d'études IHC à partir de modèles murins de maladies neurologiques

Chez Biospective, nous menons régulièrement des études sur des modèles murins de SLA, de maladie d'Alzheimer et de tauopathies, de maladie de Parkinson et de sclérose en plaques (SEP). Nous présentons ici quelques exemples illustratifs de nos colorations IHC à partir de ces modèles. Vous pouvez également en savoir plus sur nos services IHC pour ces modèles en utilisant les liens fournis.

Modèles SLA | Modèles AD | Modèles PD | Modèles MS

Coloration IHC dans des modèles murins de SLA (sclérose latérale amyotrophique)

Coloration de la TDP-43 phosphorylée chez les souris rNLS8 « Low Dox »

Coloration de la protéine TDP-43 phosphorylée (p409/410) chez des souris rNLS8 « Low Dox ».
Vue à fort grossissement d'une coupe de tissu cérébral provenant du modèle murin « Low Dox » TDP-43ΔNLS (rNLS8) de Biospective, coloré pour la phospho-TDP-43 (p409/410) à l'aide d'une détection chromogénique AEC avec contre-colorant Acid Blue 129 (Zehntner, 2008).

Dans ces modèles de SLA, nous procédons systématiquement à la coloration des cerveaux et des moelles épinières pour détecter :

TDP-43 humaine
TDP-43 phosphorylée (pTDP-43)
GFAP (astrocytes)
Iba1 (microglies)
ATP5A (mitochondries)
Motoneurones spinaux (ChAT)

Notre équipe a développé des analyses d'images robustes pour les modèles de SLA :

Veuillez consulter notre présentation interactive – Immunofluorescence multiplexe de coupes cérébrales issues du modèle murin « Low Dox » TDP-43ΔNLS de la SLA.
Nous pouvons également utiliser l'immunofluorescence multiplexe (mIF) pour colorer la jonction neuromusculaire (NMJ) dans le muscle – veuillez consulter notre « Image interactive » intitulée Dénervation de la jonction neuromusculaire (NMJ) dans le modèle murin TDP-43ΔNLS (rNLS8) de la SLA.

Si vous disposez de cerveaux, de moelles épinières, de muscles ou d'autres tissus provenant de modèles TDP-43 et/ou d'autres modèles de SLA (par exemple SOD1, C9orf72, PFN1), nous serions ravis de collaborer avec vous.

Nous pouvons également compléter la coloration IHC par des biomarqueurs liquides provenant du sang et du LCR, tels que :

Chaîne légère du neurofilament (NF-L)
TDP-43
GFAP
Cytokines (par exemple IL-1β, TNF-α)
Chimiokines
PSD-95

Pour en savoir plus sur ces biomarqueurs, veuillez consulter notre page Services de biomarqueurs cellulaires et liquides.

Coloration IHC dans les modèles murins de la maladie d'Alzheimer et des tauopathies

Deux images en champ clair de la coloration de la bêta-amyloïde et de la protéine tau phosphorylée

Coloration de l'amyloïde-β et de la protéine Tau dans lecerveau de modèles murins de la maladie d'Alzheimer et des tauopathies.
(À gauche) Vue à fort grossissement du cerveau d'une souris transgénique APP/PS1 âgée de 9 mois, colorée pour l'amyloïde bêta fibrillaire, montrant des plaques Aβ et une angiopathie amyloïde cérébrale (CAA).
(À droite) Vue à fort grossissement du cerveau d'une souris transgénique PS19 (P301S) 3 mois après l'injection de fibrilles tau préformées (PFF), montrant des agrégats tau AT8 positifs localisés et leur distribution dans les structures cérébrales affectées.

Dans ces modèles de maladie d'Alzheimer et de tauopathie, nous procédons systématiquement à la coloration des cerveaux pour détecter :

Bêta-amyloïde (divers anticorps Aβ)
La protéine tau phosphorylée (AT8)
La protéine tau à conformation modifiée (MC1)
GFAP (astrocytes)
Iba1 (microglies)
NeuN (neurones)
ASC (inflammasome)

Notre équipe a développé des analyses d'images robustes pour les modèles de la maladie d'Alzheimer, notamment :

Caractérisation des plaques amyloïdes (par exemple, taille, type [compactes, diffuses, fibrillaires], nombre) ; veuillez consulter notre ressource : Analyse des plaques amyloïdes-β dans la maladie d'Alzheimer
Analyse du microenvironnement inflammatoire ; veuillez consulter notre rubrique Innovation : Amyloïde-β et microenvironnement inflammatoire dans un modèle murin APP/PS1 de la maladie d'Alzheimer
Analyse des astrocytes réactifs ; veuillez consulter notre rubrique Innovation : Astrocytes et modèles murins de la maladie d'Alzheimer avec bêta-amyloïde

Veuillez également consulter notre présentation interactive intitulée « Tau, plutôt que l'amyloïde-β, est responsable de la neurodégénérescence dans la maladie d'Alzheimer (MA) et les modèles murins de la MA ».

Si vous disposez de cerveaux ou d'autres tissus provenant de souris APP/PS1 et/ou d'autres modèles murins ou rats de la maladie d'Alzheimer ou de tauopathies (par exemple, souris 5xFAD, souris PS19, souris ou rats APP KI, souris JNPL3, souris rTg4510), nous serions ravis de collaborer avec vous.

Nous pouvons également compléter la coloration IHC par des biomarqueurs liquides provenant du sang et du LCR ou des surnageants d'homogénat cérébral, tels que :

Chaîne légère du neurofilament (NF-L)
Aβ40 et Aβ42
Tau totale et tau phosphorylée
GFAP
Cytokines (par exemple, IL-1β, TNF-α)
Chimiokines
APOE4
PSD-95

Pour en savoir plus sur ces biomarqueurs, veuillez consulter notre page Services de biomarqueurs cellulaires et liquides.

Coloration IHC dans des modèles murins de la maladie de Parkinson

Image IHC de la coloration pSyn dans le cerveau d'une souris M83 ayant reçu une injection de PFF

ColorationpSyn dans le cerveau de souris M83 injectée avec du PFF
Vue à fort grossissement de la coloration pSyn129 dans le modèle murin de la maladie de Parkinson avec ensemencement et propagation de l'alpha-synucléine PFF de Biospective, montrant des agrégatsdenses pSyn-positifs et leur accumulation localisée dans les neurones affectés.

Dans ces modèles de la maladie de Parkinson, nous procédons systématiquement à la coloration des cerveaux pour détecter :

α-synucléine phosphorylée (pSyn129)
GFAP (astrocytes)
Iba1 (microglies)
NeuN (neurones)
Tyrosine hydroxylase (neurones dopaminergiques)

Notre équipe a développé des analyses d'images robustes pour les modèles de la maladie de Parkinson, notamment :

Microglia activée ; veuillez consulter notre innovation : Activation microgliale dans un modèle murin PFF a-synucléine de la maladie de Parkinson

Si vous disposez de cerveaux provenant de modèles murins ou rats transgéniques, knock-in, knock-out, humanisés ou induits par des toxines (par exemple, 6-OHDA, MPTP, roténone) de la maladie de Parkinson, nous serions ravis de collaborer avec vous.

Nous pouvons également compléter la coloration IHC par des biomarqueurs liquides provenant du sang et du LCR ou des surnageants d'homogénat cérébral, tels que :

Chaîne légère du neurofilament (NF-L) [voir également notre ressource - Chaîne légère du neurofilament dans les modèles de la maladie de Parkinson]
GFAP
Cytokines (par exemple, IL-1β, TNF-α)
Chimiokines
PSD-95

Pour en savoir plus sur ces biomarqueurs, veuillez consulter notre page Services de biomarqueurs cellulaires et fluidiques.

Coloration IHC dans des modèles murins de sclérose en plaques

Immunohistochimie en champ clair – MBP et IBA1 dans des modèles de démyélinisation et de neuroinflammation

Coloration MBP et Iba1 dans des modèles de démyélinisation/remyélinisation et d'inflammation auto-immune.
(à gauche) Coupe coronale représentative du cerveau d'une souris issue du modèle murin de démyélinisation et remyélinisation à la cuprizone, colorée pour la protéine basique de la myéline (MBP). L'imagerie en champ clair de la lame entière permet de visualiser l'intégrité de la myéline et les schémas régionaux de démyélinisation et de remyélinisation.
(À droite) Coupe transversale représentative de la moelle épinière d'un modèle murin EAE (encéphalomyélite auto-immune expérimentale) de démyélinisation auto-immune, colorée pour Iba1 afin de détecter les microglies activées et les macrophages infiltrants.

Dans ces modèles de sclérose en plaques (SEP), nous procédons systématiquement à la coloration des cerveaux et des moelles épinières pour détecter :

MBP, MOG ou PLP (myéline)
GFAP (astrocytes)
Iba1 (microglies et macrophages)
CD3 (cellules T)
Oligodendrocytes matures
Marqueurs des cellules précurseurs des oligodendrocytes (OPC)
Marqueurs de lésions axonales

Notre équipe a développé des analyses d'images robustes pour les modèles de SEP, notamment :

Marqueurs de lésions et dommages axonaux ; veuillez consulter notre ressource : Encéphalomyélite auto-immune expérimentale et lésions axonales

Nous pouvons également compléter la coloration IHC par des biomarqueurs liquides provenant du sang et du LCR ou des surnageants d'homogénats cérébraux, tels que :

La chaîne légère du neurofilament (NF-L) [voir également notre ressource - Encéphalomyélite auto-immune expérimentale et lésion axonale]
GFAP
Cytokines (par exemple, IL-1β, TNF-α)
Chimiokines
PSD-95

Vous pouvez en savoir plus sur ces biomarqueurs sur notre page Services de biomarqueurs cellulaires et liquides.

Si vous disposez de cerveaux, de moelles épinières ou d'autres tissus provenant d'EAE, de cuprizone et/ou d'autres modèles murins ou rats de sclérose en plaques (par exemple, LPC), nous serions ravis de collaborer avec vous.

Résumé de la coloration IHC dans les modèles de maladies neurologiques

Modèle/Maladie	Marqueurs IHC clés	Résultats typiques	Critères d'évaluation et services associés
SLA	TDP-43, pTDP-43, GFAP, Iba1, ChAT	Pathologie TDP-43, neuroinflammation, neurodégénérescence	Fonction motrice, force musculaire, EMG, atrophie musculaire par tomodensitométrie, atrophie cérébrale par IRM, NF-L dans le sang et le LCR, analyse NMJ
Maladie d'Alzheimer et tauopathies	Aβ, pTau (AT8), MC1, GFAP, Iba1	Charge plaque, agrégats tau, microgliose, astrogliose	Analyse du microenvironnement amyloïde, atrophie cérébrale par IRM, biomarqueurs liquidiens
Maladie de Parkinson	pSyn129, TH, GFAP, Iba1, NeuN	Charge pSyn, perte de neurones dopaminergiques, neuroinflammation, neurodégénérescence	Sommeil, fonction motrice, atrophie cérébrale par IRM, NF-L dans le sang et le LCR
Sclérose en plaques	MBP/MOG/PLP, Iba1, GFAP, CD3	Démyélinisation/remyélinisation, lésion axonale, neuroinflammation, infiltrats inflammatoires périphériques	Scores cliniques (par exemple, scoresEAE ), analyse des cytokines dans les tissus et les fluides, IRM (analyse MTR), NF-L dans le sang et le LCR

Ce tableau présente un résumé des principaux marqueurs IHC, des résultats typiques et des critères d'évaluation et services associés pour les modèles de SLA, de maladie d'Alzheimer et de tauopathies, de maladie de Parkinson et de SEP.

Qu'est-ce que l'immunohistochimie (IHC) ?

L'immunohistochimie (IHC) est une technique essentielle dans la recherche préclinique en neurosciences, qui permet de visualiser et de quantifier des protéines spécifiques dans les tissus. À l'aide d'anticorps marquéspar divers systèmes de reporters, l'IHC cartographie la localisation des protéines, leurs niveaux d'expression et leur distribution cellulaire (Velasco-Vales, 2022; Mebratie, 2024). Dans les études sur les maladies neurodégénératives, l'IHC est indispensable pour caractériser le mauvais repliement des protéines, la neuroinflammation, la perte neuronale, le dysfonctionnement synaptique et la pathologie des circuits, ce qui facilite l'évaluation de la progression de la maladie et les interventions thérapeutiques.

Coloration immunohistochimique (IHC) de la substance noire chez la souris

Coloration immunohistochimique (IHC) de la substance noire de souris pour les corps cellulaires et les processus dopaminergiques (à gauche) et les noyaux neuronaux (à droite).

Chez Biospective, nos laboratoires utilisent plusieurs colorateurs IHC/IF automatisés, garantissant :

Une reproductibilité élevée
Une faible variabilité
Un délai d'exécution rapide
Une cohérence optimale sur de grandes cohortes

Nous disposons de panels IHC validés pour les modèles murins de maladies neurologiques et pouvons développerdes protocoles de coloration personnalisés adaptés à vos besoins de recherche. Notre équipe de R&D dédiée, composée de scientifiques et de techniciens expérimentés, veille à ce que chaque protocole soit optimisé en termes de reproductibilité, de sensibilité et d'analyse quantitative de haute qualité.

Quelle est la différence entre l'IHC et l'IF ?

Caractéristique	Immunohistochimie (IHC)	Immunofluorescence (IF)
Multiplexage	Limité (1 à 2 marqueurs)	Élevé (fluorophores multiples)
Détection	Chromogène à base d'enzymes	Émission fluorophore
Visualisation	Champ clair	Champ large Épi-fluorescence / Confocal
Colorants	DAB, AEC, Fast Red	FITC, TRITC, Alexa Fluor, DAPI
Signal	Permanent	Sujets au photoblanchiment
Quantification	Semi-quantitative	Très quantitative
Contexte	Faible	Autofluorescence possible
Sensibilité	Modérée	Élevée
Échantillons	FFPE ou tissus congelés	FFPE et tissus congelés ; cellules cultivées
Résultat	Colorimétrique	Fluorescent

Comparaison des caractéristiques de l'immunohistochimie (IHC) et de l'immunofluorescence (IF) selon des critères clés, notamment le multiplexage, la détection, la visualisation, les colorants, le signal, la quantification, le fond, la sensibilité, les échantillons et les résultats.

Pour en savoir plus sur nos services d'immunohistochimie (IHC)

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Questions fréquentes

Quel contre-colorant Biospective utilise-t-il ?

Quel chromogène Biospective utilise-t-il ?

Quel type de récupération d'antigène Biospective utilise-t-il ?

La méthode de récupération des antigènes dépend en réalité du colorant/anticorps utilisé. Par exemple, pour l'α-synucléine phosphorylée, nous utilisons un prétraitement à la protéinase K. Pour la β-amyloïde, nous utilisons un prétraitement à l'acide formique. Pour de nombreux colorants, nous utilisons la récupération des épitopes induite par la chaleur (HIER) à l'aide de divers tampons.

Pourriez-vous valider de nouveaux anticorps pour mon étude ?

Êtes-vous en mesure d'effectuer une analyse quantitative en aveugle ?

Est-il possible de co-marquer l'amyloïde-β avec du bleu de Prusse afin de détecter des microhémorragies ?

En quoi le MC1 diffère-t-il de l'AT8 ?

Comment dois-je sélectionner les marqueurs à utiliser pour mes études ?

Références

Mots clés

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