多重免疫蛍光法 – 組織染色および定量的画像解析サービス
バイオスペクティブでは、脳、脊髄、筋肉および末梢神経組織切片の高品質な免疫蛍光染色、スライドスキャン、画像解析サービスを提供しております。
当社の免疫蛍光（IF）染色および解析サービス
バイオスペクティブでは、当社のチームメンバーは以下の分野の専門家です：
- 多重免疫蛍光染色
- 蛍光全スライドスキャニング
- 組織切片の自動定量解析
プレクリニカル神経科学分野のCRO（受託研究機関）として、バイオスペクティブはマルチプレックス免疫蛍光染色および解析に関する研究サービスを以下の分野に提供しております：
- バイオテクノロジー業界
- 製薬企業様
- 研究機関・研究所
当社は以下の組織染色および分析を専門としております：
- 脳
- 脊髄
- 筋肉
- 末梢神経
- 神経節
野生型マウスの海馬における神経細胞およびグリア 細胞の染色。
野生型マウスの冠状断面における代表的な海馬領域を示します。NeuN陽性 神経細胞は緑色、 GFAP陽性 アストロサイト は 青色、 Iba1陽性 ミクログリア は 赤色で 可視化され 、核は DAPIによる対比染色が行われています 。この染色により、海馬内におけるアストロサイトおよびミクログリアの分布と並行した神経細胞集団が強調されています。
当研究所では、最先端の高スループット自動免疫蛍光染色装置および全スライドスキャナーを活用し、品質の最大化と納期短縮に努めております。
自社研究または他社との共同動物モデル研究において、脳、脊髄、筋肉、末梢神経、神経節などの組織を採取された場合、染色、スライドスキャン、 画像解析 のため 、 当社へご送付いただけます 。
神経疾患モデルにおける多重免疫蛍光研究
バイオスペクティブでは、ALS（筋萎縮性側索硬化症）、アルツハイマー病およびタウ病変、パーキンソン病、多発性硬化症（MS）のマウスモデルを用いた研究を日常的に実施しております。ここでは、これらのモデルから得られたマルチプレックス免疫蛍光染色の代表的な例をご紹介いたします。また、提供されているリンクより、これらのモデルに対する当社のマルチプレックス免疫蛍光（mIF）サービスについて、さらに詳しくご覧いただけます。
筋萎縮性側索硬化症（ALS）マウスモデルにおけるmIF染色
rNLS8 （TDP-43ΔNLS） マウスの運動皮質におけるT DP -43病理とグリア活性化。
rNLS8マウスの冠状FFPE切片における代表的な運動皮質領域。リン酸化TDP-43（pTDP-43） は黄色、ヒトTDP-43（hTDP-43） は赤色、 Iba1陽性ミクログリアは 緑色、 のGFAP陽性アストロサイト は紫色で可視化されています 。 活性化ミクログリアは突起を伸長させ、神経細胞体およびTDP-43蓄積領域に接触しています。一方、アストロサイトは 反応性GFAP発現亢進 を示しています 。この多重染色により、病原性TDP-43凝集と、rNLS8 ALSモデルに特徴的なミクログリアおよびアストロサイトの反応が同時に可視化されています。
これらのALSモデルにおいて、当研究室では脳および脊髄を定期的に以下の染色処理しております：
- ヒトTDP-43
- リン酸化TDP-43（pTDP-43）
- GFAP（星状細胞）
- Iba1（ミクログリア）
- ATP5A（ミトコンドリア）
- 脊髄運動ニューロン（ChAT）
また、神経筋接合部（NMJ）の染色には以下の抗体を使用しております：
- α-ブンガロトキシン
- SV2A
- β-III-チューブリン
当チームはALSモデル向けの堅牢な画像解析法を開発いたしました：
- 「低ドキソルビシン」TDP-43ΔNLSマウスモデルALSにおける脳切片の多重免疫蛍光法に関するインタラクティブプレゼンテーションをご覧ください。
- 「画像インタラクティブ」をご覧ください –ALSモデルマウスTDP-43ΔNLS (rNLS8)における神経筋接合部（NMJ）の脱神経状態。
TDP-43モデルおよび／またはその他のALSモデル（例：C9orf72、SOD1、PFN1）由来の脳、脊髄、筋肉、その他の組織をお持ちでしたら、喜んで共同研究を承ります。
また、免疫組織化学染色（IHC）を補完するため、血液や脳脊髄液（CSF）からの液体バイオマーカーも提供可能です。例えば：
これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。
アルツハイマー病およびタウ病変マウスモデルにおけるmIF染色
AAV-hTauを投与した野生型 マウス における病理学的タウ凝集体
AAV-hTauを投与した野生型マウスの脳から採取した冠状断面の代表的な梨状皮質領域 。 リン酸化タウ （AT8）は緑色、 Iba1陽性ミクログリアは 赤色、 GFAP陽性アストロサイトは 紫色で 可視化され 、 核は DAPIで対比染色されています 。活性化ミクログリアはタウ陽性ニューロンに向けて突起を伸長し、アストロサイトは 反応性GFAP発現亢進を示しています 。
APP/PS1マウス脳における アミロイドβ病理とグリア活性化
APP/PS1 トランスジェニックマウス脳の 代表的な冠状断面像です 。 OC抗体陽性の Aβ線維は緑色、 GFAP陽性の星状細胞は 赤色、 Iba1陽性のミクログリアは 黄色で 可視化され 、核は DAPI （青色） で対比染色されています 。 活性化ミクログリアはアミロイド沈着部に向けて突起を伸長し、アストロサイトは 反応性GFAP発現亢進を示しています 。この多重染色により 、 本 APP/PS1アルツハイマー病モデルで 病変が生じる領域において、線維状アミロイドβの蓄積と、それに連動したミクログリアおよびアストロサイトの反応が浮き彫りとなりました 。
これらのアルツハイマー病およびタウ病変モデルにおいて、当研究室では脳組織に対し以下の染色を定期的に実施しております：
- βアミロイド（各種Aβ抗体）
- リン酸化タウ（AT8）
- 構造変化タウ（MC1）
- GFAP（星状細胞）
- Iba1（ミクログリア）
- ニューン（ニューロン）
- ASC（インフlammasome）
当チームは、アルツハイマー病モデル向けの堅牢な画像解析を開発いたしました。具体的には以下の内容を含みます：
- アミロイド斑の特性評価（例：サイズ、タイプ［緻密型、拡散型、線維状］、個数）；詳細はリソース「アルツハイマー病におけるアミロイドβ斑分析」をご参照ください
- 炎症性微小環境解析；詳細は当社のイノベーション：APP/PS1アルツハイマー病マウスモデルにおけるアミロイドβと炎症性微小環境をご参照ください
- 反応性アストロサイト解析；詳細は当社のイノベーション「アルツハイマー病マウスモデルにおけるアストロサイトとアミロイドβ」をご参照ください
また、当社のインタラクティブプレゼンテーション「アルツハイマー病（AD）およびADマウスモデルにおける神経変性を促進するのはアミロイドβではなくタウである」もご参照ください。
APP/PS1マウス、その他のアルツハイマー病モデルマウス・ラット、あるいはタウ病変モデル（例： PS19マウス、5xFADマウス、APP KIマウス・ラット、JNPL3マウス、rTg4510マウス）の脳組織その他の組織をお持ちでしたら、ぜひご提供ください。
また、免疫組織化学染色（IHC）を補完するため、血液・脳脊髄液（CSF）または脳ホモジネート上清からの液体バイオマーカー分析も可能です。具体的には：
これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。
パーキンソン病マウスモデルにおけるmIF染色
リン酸化α-シヌクレイン病理と M83+/-マウスの梨状皮質におけるミクログリアの関与
M83トランスジェニックマウス （ヒトA53T α-シヌクレインを過剰発現）の冠状FFPE切片における代表的な梨状皮質領域 。 本マウスにはα-シヌクレイン 既成線維（PFFs） が注入されています 。 リン酸化α-シヌクレイン（pSyn129） は緑色、 NeuN陽性神経細胞核は 青色、 Iba1陽性ミクログリアは 赤色で 可視化されています 。 蓄積した pSynは 、神経細胞集団内におけるPFF誘発性シヌクレイン病理を浮き彫りにしており、ミクログリアは pSyn負荷を受けた 神経細胞体および周囲の神経膠質組織 に向けて突起を伸長しています 。この多重染色により、PFFを投与 した M83マウスの 梨状皮質内における、誘導されたα-シヌクレイン凝集とミクログリア活性化との関連性が明らかにされています 。
これらのパーキンソン病モデルにおいて、当研究室では脳組織の染色を定期的に実施しております：
- リン酸化α-シヌクレイン（pSyn129）
- GFAP（星状細胞）
- Iba1（ミクログリア）
- ニューン（ニューロン）
- チロシン水酸化酵素（ドーパミン作動性ニューロン）
当チームは、パーキンソン病モデルに対する堅牢な画像解析技術を開発いたしました。具体的には以下のモデルが含まれます：
- 活性化ミクログリア；詳細は当チームのイノベーション：パーキンソン病モデルマウスにおけるα-シヌクレインPFFによるミクログリア活性化をご参照ください
パーキンソン病のモデルとして、α-シヌクレインおよび／またはその他のトランスジェニック、ノックイン、ノックアウト、ヒト化、あるいは誘導性毒素（例：MPTP、6-OHDA、ロテノン）を組み込んだマウスまたはラットの脳組織をお持ちでしたら、喜んで共同研究を承ります。
また、免疫組織化学染色を補完するため、血液・脳脊髄液（CSF）または脳ホモジネート上清からの体液性バイオマーカーも提供可能です。例：
- ニューロフィラメント軽鎖（NF-L）［当リソース「パーキンソン病モデルにおけるニューロフィラメント軽鎖」もご参照ください］
- GFAP
- サイトカイン（例： IL-1β、TNF-α）
- ケモカイン
- PSD-95
これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。
多発性硬化症マウスモデルにおけるmIF染色
クプリゾン脱髄モデルにおけるミエリン喪失
クプリゾン誘発性脱髄マウス脳の冠状FFPE切片における代表的な脳梁領域 。ミエリン塩基性タンパク質 （MBP）は赤色で 可視化され 、 ミエリンの喪失および断片化領域を強調しています。一方、核 はDAPI （青色） で対比染色されています 。この染色法により、クプリゾン処理に伴う緻密なミエリンの特異的な減少が明瞭に示され、影響を受けた白質路全体における脱髄の重症度評価が可能となります。
これらの多発性硬化症（MS）モデルにおいて、当研究室では脳および脊髄に対し、以下の染色を定期的に実施しております：
- MBP、MOG、またはPLP（ミエリン）
- GFAP（星状細胞）
- Iba1（小膠細胞およびマクロファージ）
- CD3（T細胞）
- 成熟オリゴデンドロサイト
- オリゴデンドロサイト前駆細胞（OPC）マーカー
- 軸索損傷マーカー
当チームは、多発性硬化症モデル向けの堅牢な画像解析技術を開発いたしました。具体的には以下の内容を含みます：
- 軸索損傷・障害マーカー；詳細は当チームのリソース「実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）と軸索損傷」をご参照ください
また、免疫組織化学染色を補完するため、血液や脳脊髄液、あるいは脳ホモジネート上清からの液体バイオマーカーも活用できます。例えば：
- ニューロフィラメント軽鎖（NF-L）［関連リソース：実験的自己免疫性脳脊髄炎および軸索損傷もご参照ください］
- GFAP
- サイトカイン（例： IL-1β、TNF-α）
- ケモカイン
- PSD-95
これらのバイオマーカーに関する詳細は、当社の「体液・細胞バイオマーカーサービス」ページでご確認いただけます。
EAE、クプリゾン、および／またはその他のマウスやラットを用いた多発性硬化症モデル（例：LPC）由来の脳、脊髄、その他の組織をお持ちでしたら、喜んで共同研究させていただきます。
マルチプレックス免疫蛍光法（mIF）とは何でしょうか？
多重免疫蛍光法（mIF）は、 アレクサ・フロールシリーズ（AF488、AF555、AF647、AF750） など、スペクトル特性が異なる蛍光色素を結合させた抗体を用いることで、同一の組織切片において複数のタンパク質標的を同時に検出できる強力な技術です 。 空間的コンテキストを保持することで、 mIFは 細胞内共発現、細胞内局在、細胞間相互作用、および微小環境の組織化に関する詳細なマップを提供します。この手法 により、 脳、脊髄、筋肉などの同一組織領域内で、病原性タンパク質凝集体、活性化グリア細胞、神経細胞集団など、 複数のマーカー間の相互作用を直接可視化することが可能となります。 神経変性疾患研究において、 mIFは 複雑な病態の解明に不可欠です。これには疾患関連タンパク質の共凝集、異質なグリア細胞表現型、ミクログリアとニューロンの 接触・相互作用、神経炎症反応などが 含まれます 。また、疾患進行の堅牢な定量的評価、空間的バイオマーカー解析、治療効果の評価を支援します（Hickey, 2021;Park, 2022;Bull, 2024）。
マウス腓腹筋における神経筋接合部 （NMJ） の可視化。
（左） マウス 腓腹筋の代表的な切片。 アセチルコリン（ACh）受容体のα-ブンガロトキシン（BTX） 標識は緑色で 可視化され 、シナプス小胞 タンパク質 SV2Aおよび チューブリン は 赤色で 可視化され 、核は DAPI （青色）で対比染色されています。 この染色により、筋線維内の神経筋接合部の構造、すなわちシナプス前およびシナプス後コンパートメントの可視化が可能となります。
（右）部分的 および 完全な神経支配を受けた神経筋接合部 （NMJ）を示す高倍率 画像。
マウス脊髄における運動ニューロンの可視化。
マウス脊髄の代表的な切片です。 GFPを発現するニュー ロンは緑色で可視化され 、 ChAT陽性のコリン作動性ニューロンは赤色で 可視化されています 。核 はDAPI （青色） で対比染色されています 。
バイオスペクティブ社のプロセス図：動物モデルからの組織採取、組織切片作成、多重免疫蛍光染色、全スライドスキャン、および定量的画像解析の工程を示しております。
マウス黒質におけるドーパミン作動性細胞体および突起（左）ならびに神経細胞核（右）の免疫蛍光（IF）染色。
バイオスペクティブでは、当社の研究所では 複数の自動免疫組織化学／免疫蛍光染色装置を活用し 、以下の点を保証しております：
- 高い再現性
- 低い変動性
- 迅速な結果提供
- 大規模コホート全体での最適な一貫性
神経疾患の げっ歯類 モデル向けに 十分に検証済みの多重IFパネルを維持しており 、お客様の研究ニーズに合わせたカスタム染色プロトコルの 開発も 可能です。経験豊富な科学者と技術者からなる専任の研究開発チームが、 再現性、感度、高品質な定量分析を最適化したプロトコルを保証いたします 。
当社の多重免疫蛍光法サービスについて、さらに詳しくお知りになりたい場合は
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TDP-43 ΔNLS (rNLS8) ALS 治療薬開発用マウス
このリソースは、ALSのΔNLS（deltaNLS、hTDP-43ΔNLS、hTDP-43DeltaNLS、dNLS、TDP43 NLS、rNLS8）TDP-43トランスジェニックマウスモデルの使用に関する情報を提供しており、前臨床治療研究に役立てることができます。