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Modèles de la maladie de Parkinson

Modèles d'ensemencement et d'étalement de fibrilles préformées d'α-synucléine (PFF) récapitulant différents aspects de la maladie de Parkinson.

Modèles de fibrilles préformées d'α-synucléine (PFF) pour la maladie de Parkinson

La propagation pathologique de l'alpha-synucléine mal repliée, caractéristique de la maladie de Parkinson chez l'homme, peut être modélisée dans le cerveau des animaux par l'injection de fibrilles préformées d'α-synucléine (PFF). Ce "modèle d'ensemencement et de propagation des PFF" peut être induit chez des souris transgéniques surexprimant l'α-synucléine humaine ou chez des souris ou des rats de type sauvage.

Ce modèle animal hautement reproductible de synucléinopathie reproduit plusieurs caractéristiques clés de la MP humaine, notamment les agrégats d'α-synucléine dans le corps cellulaire et les neurites, la neurodégénérescence (mesurable par la chaîne légère des neurofilaments dans le sang et le LCR, ainsi que par des mesures in vivo de l'atrophie cérébrale basées sur l'IRM), la microgliose, l'astrogliose et la dénervation dopaminergique. Les déficits moteurs et les altérations de l'architecture du sommeil peuvent également être mesurés quantitativement dans ce modèle.

Deux coupes de tissu cérébral traitées par immunohistochimie (IHC) pour mettre en évidence l'alpha-synucléine phosphorylée, qui est importante dans le contexte de la recherche sur la maladie de Parkinson.

Modèle de souris AAV A53T Alpha-Synucléine de la maladie de Parkinson

L'injection de vecteurs du virus adéno-associé (AAV) permet de générer la pathologie de l'alpha-synucléine dans le cerveau de rongeurs adultes. Dans ce modèle murin de la maladie de Parkinson, des souris de type sauvage (C57BL/6) subissent une injection stéréotaxique de vecteurs AAV surexprimant l'alpha-synucléine humaine mutante A53T dans la substantia nigra pars compacta.

Ce modèle robuste de synucléine présente pathologiquement des agrégats d'α-synucléine dans le soma des neurones et les neurites, une neuroinflammation (y compris une microglie activée et des astrocytes réactifs), une neurodégénérescence et une dénervation dopaminergique. Des déficits moteurs significatifs sont observés dans ce modèle suite à la perte unilatérale de neurones dopaminergiques, y compris des altérations dans le test d'agrippement des membres postérieurs, le test du rotarod, le test de suspension de la queue et le test du cylindre.

Dénervation dopaminergique du striatum ipsilatéral démontrée par immunomarquage de la tyrosine hydroxylase

Transposabilité de nos modèles de Parkinson à la maladie humaine

Synucléine de faible magnitude

Agrégats d'alpha-synucléine

Les agrégats de α-synucléine mal repliée sont une caractéristique pathologique clé de la maladie de Parkinson chez l'homme. Des corps et des neurites de Lewy sont observés dans les neurones dopaminergiques de la substance noire et d'autres régions du cerveau. La pathologie de la α-synucléine mal repliée suit également un schéma spatiotemporel (Braak, 2003). Nous observons des niveaux élevés de α-synucléine phosphorylée dans le soma et les processus neuronaux dans nos modèles induits par AAV et par fibrilles préformées (PFF). Nous avons également une forte propagation dans les modèles PFF.

Microglies activées et astrocytes réactifs

Microglies activées et astrocytes réactifs

La neuroinflammation est une caractéristique pathologique clé de la maladie de Parkinson. La microglie activée et les astrocytes réactifs jouent un rôle clé dans la pathogenèse (Kam, 2020; Chen, 2023). Nous avons découvert des schémas spatiotemporels distincts de neuroinflammation dans nos modèles murins induits par AAV et PFF. Nous avons également mis en évidence des altérations de la morphologie microgliale et astrocytaire dans ces modèles à l'aide d'algorithmes basés sur la vision par ordinateur et l'apprentissage automatique que nous avons développés.

Résultats des tests AAV - EBST (Box and Whiskers)

Perte de neurones dopaminergiques et déficits moteurs

Les symptômes moteurs extrapyramidaux sont une caractéristique clinique centrale de la maladie de Parkinson. Le dysfonctionnement moteur résulte de la perte de neurones dopaminergiques dans la substance noire compacte (SNc) et de la dénervation du striatum (par exemple, le noyau caudé et le putamen). En ciblant la SNc avec des AAV surexprimant la α-synucléine ou avec des PFF de α-synucléine, nous avons montré une neurodégénérescence des neurones dopaminergiques et une perte des terminaisons dopaminergiques dans nos modèles. Ces souris présentent des altérations de la fonction motrice lors de divers tests, notamment le test de suspension de la queue, le test du cylindre, le test de préhension des membres postérieurs et le test de la tige tournante.

M83 mis à jour Durée du sommeil % par bin

Troubles du sommeil

Les troubles du sommeil sont des symptômes non moteurs courants de la maladie de Parkinson (Stefani et Högl, 2020) qui affectent jusqu'à environ 85 % des patients (Asadpoordezaki, 2025). À l'aide d'un système non invasif d'évaluation du sommeil chez la souris, nous avons démontré de manière reproductible des altérations de l'architecture veille-sommeil (par exemple, le pourcentage de sommeil, la durée des périodes de sommeil) lorsque des PFF d'alpha-synucléine sont injectés dans le noyau olfactif antérieur (AON) de souris transgéniques surexprimant la mutation humaine A53T de l'alpha-synucléine.

IRM mince piriforme M83

Atrophie cérébrale régionale

Les biomarqueurs d'imagerie cérébrale sont largement utilisés dans les essais cliniques sur les maladies neurodégénératives, y compris la maladie de Parkinson. Les mesures régionales du volume et de l'épaisseur corticale dérivées de l'IRM sont très sensibles à l'atrophie cérébrale dans la MP. Il a été démontré que la progression de l'atrophie cérébrale basée sur l'IRM dans la maladie de Parkinson est cohérente avec l'hypothèse de propagation de type prion de la &alpha-synucléine (Tremblay, 2021; Abdelgawad, 2023). Grâce à l'acquisition d'IRM du cerveau entier à haute résolution et au traitement et à l'analyse entièrement automatisés des images, nous avons montré une atrophie cérébrale régionale reproductible dans les modèles de MP basés sur les PFF et les AAV, ce qui constitue une mesure fiable de la neurodégénérescence en vie.

M83 plasma CSF NfL

Neurofilament léger élevé dans le LCR et le plasma

La chaîne légère des neurofilaments est augmentée dans le LCR et le plasma des patients atteints de la MP (Bäckström, 2020 ; Urso, 2023; Pedersen, 2024). Les mesures des chaînes légères des neurofilaments sont couramment utilisées dans les essais cliniques sur la MP. Des taux élevés de chaînes légères des neurofilaments ont été observés dans plusieurs modèles animaux de la MP. Nous observons des augmentations très significatives des taux plasmatiques et de LCR de neurofilaments légers dans nos modèles murins avec des PFF d'alpha-synucléine humaine injectés dans le noyau olfactif antérieur (AON) ou le faisceau médian du cerveau antérieur (MFB) de souris transgéniques M83 +/-.

Modèles de souris pour la maladie de Parkinson Caractéristiques

La présentation interactive ci-dessous vous permet d'explorer la caractérisation de notre modèle de souris AAV-Synucléine, y compris les données in vivo et les images à haute résolution de coupes de tissus entières obtenues par immunofluorescence multiplex.

Vous pouvez simplement naviguer dans cette "histoire d'images" à l'aide du panneau de gauche.

Vous pouvez effectuer un panoramique sur les images de microscopie à haute résolution en utilisant le bouton gauche de la souris. Vous pouvez effectuer un zoom avant et arrière à l'aide de la souris/du trackpad (haut/bas) ou des boutons + et - situés dans le coin supérieur gauche. Vous pouvez basculer (on/off), changer la couleur et ajuster les paramètres d'image pour les canaux et les segmentations dans le panneau de contrôle situé dans le coin supérieur droit.

Nous vous conseillons d'utiliser le mode plein écran pour une meilleure expérience interactive.

Neurodégénérescence et neuroinflammation dans le modèle de souris AAV-Synucléine

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Logo de Biospective Préclinique

Cette présentation interactive illustre certaines des caractéristiques intéressantes de la fonction motrice, de l'imagerie cérébrale et de la pathologie du modèle de souris AAV A53T α-synucléine de Biospective pour la maladie de Parkinson (MP).

Ce modèle a été créé en injectant à des souris C57BL/6 âgées de 12 semaines des vecteurs AAV-human-A53T-synucléine ou AAV-null (contrôle) unilatéralement dans la substantia nigra pars compacta (SNc) gauche. 2 µL de vecteur ont été perfusés à un taux de 0,4 µL/min à l'aide d'un appareil stéréotaxique numérique muni d'un micro-injecteur automatisé.

Vue de l'atlas coronal du site d'injection du SNc

Des images d'immunofluorescence multiplex (mIF) ont été générées par immunomarquage pour phospho-Syn129, GFAP, Iba-1, Tyrosine Hydroxylase, Noyaux Dopaminergiques, et contre-coloration avec le colorant nucléaire DAPI. Les coupes de tissus ont été numérisées à l'aide d'un scanner de diapositives à haut débit et traitées à l'aide de la plateforme logicielle PERMITSTM de Biospective.

Pour naviguer dans cette histoire d'images, vous pouvez utiliser les flèches et/ou l'icône de la table des matières dans le coin supérieur droit de ce panneau.

Panneau de navigation avec infobulles

Vous pouvez également interagir à tout moment avec l'image microscopique dans la visionneuse à droite pour explorer davantage ces données à haute résolution.

Neurodégénérescence dans la Substantia Nigra

Comme on peut le voir sur cette image microscopique, il y a une perte substantielle de neurones dopaminergiques TH-positifs dans le SNc ipsilatéral par rapport à l'hémisphère contralatéral. À titre de référence, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau cérébral est fournie ci-dessous.

Coupe coronale du cerveau au niveau de la Substantia Nigra

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma -3.2) avec étiquettes de neuroanatomie

En utilisant notre logiciel d'analyse quantitative PERMITSTM, nous avons quantifié la coloration TH dans le SNc. Les graphiques ci-dessous montrent une réduction hautement significative dans l'hémisphère ipsilatéral.

Tyrosine Hydroxylase et densité cellulaire dans la Substantia Nigra

Densité de la coloration TH et densité cellulaire pour les injections d'AAV-Syn par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle); moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Nous avons constaté une atrophie cérébrale significative dans le SNc en générant des données de volume régional à partir d'IRM anatomiques in vivo, ce qui correspond bien à la perte de neurones TH-positifs. Des images IRM ont été acquises sur des souris ayant reçu différentes doses d'AAV-Synucléine 4 semaines après l'inoculation, à l'aide d'un scanner IRM animalier de 7T.

Atrophie cérébrale à l'IRM dans la Substantia Nigra

IRM anatomique avec segmentation du SNc, ainsi qu'un graphique de la différence relative entre le SNc ipsilatéral et le SNc controlatéral. Les doses d'AAV-Syn injectées (GC) étaient de 1×109 (jaune), 5×109 (bleu) et 1×1010 (aqua). p<0,05, *p<0,01.

Neurones dopaminergiques dans le SNc controlatéral

Cette image microscopique montre le SNc controlatéral (hémisphère droit) qui présente en rouge les corps cellulaires et les processus TH-positifs non affectés. Les noyaux colorés au DAPI sont représentés en bleu.

Perte de neurones dopaminergiques dans le SNc ipsilatéral

Cette image microscopique montre le SNc ipsilatéral (hémisphère gauche), qui présente une réduction substantielle des corps cellulaires et des processus TH-positifs (en rouge) par rapport à l'hémisphère controlatéral. Les noyaux colorés au DAPI sont représentés en bleu.

Neurodégénérescence dans le caudé-putamen et déficits moteurs dopaminergiques

Cette image microscopique montre une dénervation dopaminergique sévère du caudé-putamen ipsilatéral (hémisphère gauche) (perte de terminaux TH-positifs). Pour référence, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau cérébral approximatif est fournie ci-dessous.

Image coronale du cerveau de souris au niveau du striatum

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma +0.86) avec étiquettes de neuroanatomie

En utilisant notre logiciel d'analyse quantitative PERMITSTM, nous avons quantifié la coloration TH dans le Caudé-Putamen. Le graphique ci-dessous montre une réduction hautement significative dans l'hémisphère ipsilatéral.

Coloration de la tyrosine hydroxylase dans le caudé-putamen

Densité de la coloration TH pour les injections d'AAV-Syn par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle); moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Cette perte d'innervation dopaminergique correspond bien aux déficits moteurs unilatéraux chez ces souris, y compris une augmentation hautement significative de l'utilisation de la patte ipsilatérale pendant le test du cylindre, une diminution de la latence à la chute dans le test du rotarod et une augmentation des balancements vers le côté controlatéral dans le test de suspension de la queue (TSST).

Illustration des tests de motricité et des tracés de l'AAV-Syn par rapport à l'AAV-null

Test du cylindre, test du rotarod et test de suspension de la queue (TSST) pour les injections d'AAV-Syn par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, t-test, **** p<0,0001.

Perte de terminaisons dopaminergiques dans le caudé-putamen ipsilatéral

Cette vue à fort grossissement montre l'étendue sévère de la perte des terminaux dopaminergiques (TH positifs) dans le striatum ipsilatéral. Il reste quelques axones (bien que dystrophiques).

Comme pour le SNc, nous avons observé une atrophie cérébrale dans le caudé-putamen par l'analyse quantitative d'IRM anatomiques à haute résolution, ce qui établit une relation in vivo-ex vivo entre la neuro-imagerie et les mesures de l'IF.

Atlas IRM et données volumiques au niveau du striatum

IRM anatomique avec segmentation du caudé-putamen, ainsi qu'un graphique de la différence relative entre le caudé-putamen ipsilatéral et le caudé-putamen controlatéral. Les doses d'AAV-Syn injectées (GC) étaient de 1×109 (jaune), 5×109 (bleu) et 1×1010 (aqua). p<0,05, *p<0,01.

Microgliose en réponse à l'expression de l'a-synucléine humaine A53T

Sur cette image à faible grossissement, on peut facilement apprécier la densité plus élevée de microglies marquées par Iba-1 dans l'hémisphère ipsilatéral (indiqué par l'encadré) par rapport à l'hémisphère controlatéral dans le cerveau d'une souris ayant reçu une injection d'AAV-Syn.

Les graphiques ci-dessous montrent la densité de coloration de l'Iba-1 dans différentes régions du cerveau, avec une augmentation très significative de la coloration chez les souris AAV-Syn.

Données PERMITS sur la densité de la coloration Iba-1

Densité de la coloration Iba-1 pour les injections d'AAV-Syn par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Nous avons effectué une analyse morphologique de la microglie en utilisant une nouvelle approche de vision par ordinateur et d'apprentissage automatique développée par notre équipe. Cet algorithme entièrement automatisé permet de classer les microglies non activées (ramifiées) et activées (non ramifiées).

Exemples de morphologie microgliale activée et non activée

Les graphiques ci-dessous montrent l'activation microgliale dans différentes régions du cerveau, avec une augmentation très significative de l'activation microgliale chez les souris AAV-Syn.

Tracés des données PERMITS montrant une microglie activée

Activation microgliale pour les injections d'AAV-Syn par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Coloration de l'Iba-1 à proximité de l'α-synucléine phosphorylée

Cette vue à fort grossissement montre la densité accrue de microglies marquées à l'Iba-1 dans les zones présentant des agrégats d'α-synucléine phosphorylée.

Astrogliose en réponse à l'expression de l'α-synucléine humaine A53T

Cette image de microscopie à faible grossissement montre une densité plus élevée d'astrocytes GFAP-positifs dans l'hémisphère ipsilatéral (indiqué par la boîte) d'un cerveau de souris ayant reçu une injection d'AAV-Syn. Les graphiques ci-dessous montrent la densité de coloration de la GFAP dans différentes régions du cerveau.

Tracés des données PERMITS montrant la densité de la coloration GFAP

Densité de la coloration GFAP pour les injections d'AAV-Syn par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Astrogliose et microgliose

Cette image de microscopie à fort grossissement montre un niveau élevé de microglies Iba-1-positives et d'astrocytes GFAP-positifs dans l'hémisphère ipsilatéral. Notez la morphologie "activée" de ces cellules neuroinflammatoires.

Résumé

Le modèle de souris AAV A53T α-syn récapitule de nombreuses caractéristiques de la maladie de Parkinson. Ce modèle montre le développement progressif d'un dysfonctionnement moteur asymétrique (dû à une injection unilatérale), et la perte associée de neurones SNc positifs pour la TH et l'expression striatale de la TH.

L'AAV A53T α-synucléine augmente localement l'atrophie cérébrale, la densité microgliale et les niveaux d'activation, ainsi que la densité et l'hypertrophie des astrocytes. Des études sont prévues pour étudier plus en détail les relations spatiales entre l'activation microgliale, l'hypertrophie astrocytaire et l'agrégation de l'α-synucléine.

Le modèle de souris AAV A53T α-synucléine est bien adapté au développement de médicaments étant donné les résultats quantitatifs in vivo et ex vivo. Il présente également des avantages par rapport à d'autres modèles en tant qu'outil de criblage pour de nouvelles thérapies de modification de la maladie ciblant la pathologie liée à l'α-synucléine, notamment le délai relativement court nécessaire pour réaliser des études précliniques dans ce modèle.

N'hésitez pas à explorer davantage l'image microscopique dans la visionneuse.

Nous serions heureux de discuter de ce modèle et de notre caractérisation si vous souhaitez nous contacter.

Table des matières
Panneau de contrôle
Section: SNc Section 1
Canaux

En savoir plus sur la caractérisation de ces modèles murins de la maladie de Parkinson, sur nos mesures validées et sur nos services de CRO en neurosciences précliniques.

FAQ

Quelles sont les principales différences entre les modèles de souris atteintes de la maladie de Parkinson injectées avec des PFF et des AAV?


Quels sont les avantages de l'injection de PFF chez les souris transgéniques ?


Comment mesurer la neurodégénérescence dans les modèles animaux de la α-synucléine ?


Des symptômes non moteurs peuvent-ils être observés dans les modèles murins de la α-synucléine ?


Références


Mots-clés


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