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separatorHistologie de la protéine tau chez les modèles murins et rats atteints de maladies neurodégénératives

Histologie de la protéine tau chez les modèles murins et rats atteints de maladies neurodégénératives

Organisme de recherche clinique mondial spécialisé dans l'analyse de la protéine tau et de la neuroinflammation associée dans des modèles animaux.
Immunofluorescence multiplexe validée et analyse d'image avancée de la protéine tau dans le cerveau de souris et de rats.

Obtenir un devis

Biospective possède une expertise de pointe dans la fourniture de services d'histologie tau, y compris la coloration par immunofluorescence multiplexe (mIF) à l'aide de divers anticorps. Nous disposons de capacités uniques pour mesurer les caractéristiques de la pathologie tau ( par exemple, l'agrégation, la phosphorylation, la conformation, le clivage) et analyser spatialement les relations complexes avec d'autres pathologies (par exemple, les plaques Aβ) et la neuroinflammation associée, y compris les microglies activées et les astrocytes réactifs.

Table des matières

Quels sont les services de recherche sous contrat proposés par Biospective pour la coloration et l'analyse de la protéine Tau ?

Coloration par immunofluorescence multiplex, segmentation, analyse morphologique et spatiale de la protéine tau dans des coupes de tissus provenant de modèles de rongeurs atteints de la maladie d'Alzheimer et d'autres tauopathies.

Biospective fournit une caractérisation de bout en bout des agrégats de tau et des réponses gliales en utilisant la coloration tissulaire par immunofluorescence multiplex avancée (mIF), l'imagerie haute résolution de la lame entière et l'analyse morphologique automatisée basée sur l'apprentissage automatique et l'apprentissage profond.

Nos capacités de coloration Tau et d'analyse d'images

Coloration de la protéine Tau et multiplexage

  • Nous proposons des colorations IHC/mIF utilisant une grande variété d'anticorps, notamment

    • Tau non phosphorylée : Tau15-25, Tau1-100, HT7

    • Tau phosphorylée : AT8, PHF1, CP13, pTau-217

    • Tau clivée : N368, Asp421

    • Conformation de la maladie : MC-1

    • Structure des fibrilles amyloïdes : pFTAA

  • Nous développons continuellement des protocoles pour d'autres anticorps et nous disposons d'excellentes capacités pour la mise en œuvre de marqueurs personnalisés.

  • Pour obtenir une image plus complète des processus pathologiques dans les coupes de tissus, nous disposons d'une grande expertise en matière de coloration à l'aide de panels IF multiplex.

Quantification et analyse des images

  • Nous effectuons la quantification de la densité des colorations IHC/mIF sur des lames entières et la quantification de la charge régionale dans des régions d'intérêt spécifiques.

  • Nous pouvons également effectuer des analyses spatiales complexes pour étudier les relations entre les protéines mal repliées, la neuroinflammation et la neurodégénérescence.

Quel est le flux de travail de Biospective pour la coloration et l'analyse quantitative de la protéine Tau ?

Protocoles bien établis pour la préparation des échantillons de cerveau, la coloration, le balayage des lames et l'analyse quantitative des images.

Notre processus de coloration et d'analyse de la protéine tau

Chez Biospective, nous avons mis en place un processus standardisé et hautement reproductible en plusieurs étapes pour la coloration et l'analyse de la protéine tau à partir de cerveaux fixés au formol :

  1. Préparation de l'échantillon

    • coupe microtomique de haute précision ou cryosectionnement de cerveaux FFPE ou fixés et congelés.

    • Protocoles de récupération d'antigènes personnalisés, optimisés pour chaque anticorps spécifique à la protéine tau, garantissant une liaison de haute affinité et la préservation de la morphologie de la protéine tau. Les conditions de récupération sont également personnalisées pour tout anticorps supplémentaire inclus dans le panel multiplex. Nous effectuons systématiquement une récupération induite par la chaleur (HIER), une récupération enzymatique, une récupération par l'acide formique ou une combinaison de ces méthodes.

    • Contrôle de qualité rigoureux de la qualité et de la spécificité de la coloration ainsi que de l'intégrité des tissus.

  2. Coloration (IHC ou IF multiplex)

    • Marqueurs Tau

    • Marqueurs du microenvironnement pathologique

      • Microglie(Iba-1 et autres marqueurs microgliaux)

      • Astrocytes (GFAP)

      • Neurones (NeuN ; marqueurs de sous-type neuronal, par exemple TH pour les neurones dopaminergiques)

      • Autres protéines mal repliées(par exemple, plaques amyloïdes-β, α-synucléine, TDP-43)

      • Marqueurs subcellulaires et biochimiques(par ex. lysosomes, autophagie, mitochondries, neurodégénérescence)

      • DAPI (noyaux)

    • Avantages du multiplexage

      • Le multiplexage permet une analyse spécifique du type de cellule du microenvironnement sur une seule lame, caractérisant avec précision le paysage cellulaire entourant les plaques individuelles.

  3. Imagerie

    • Balayage fluorescent multicanal de la section entière

  4. Analyse quantitative
    Nous avons développé une analyse quantitative entièrement automatisée pour l'immunofluorescence multiplex afin de compléter l'analyse de la protéine tau, y compris la segmentation et le comptage des plaques de bêta-amyloïde, l'analyse de la morphologie des cellules gliales et l'analyse du microenvironnement.

Illustration du processus de Biospective consistant à prélever des échantillons de tissus cérébraux sur des modèles animaux, à effectuer des coupes de tissus, des colorations par immunofluorescence multiplex, à scanner des lames entières et à procéder à une analyse quantitative des images.

Lignes directrices pour le prélèvement, la préparation et l'expédition des échantillons

Nous fournissons une assistance complète pour garantir l'intégrité des échantillons et la fiabilité des données :

  • Collecte des échantillons : Les animaux doivent être perfusés avec du PBS froid et/ou du formol tamponné neutre à 10 %, et les cerveaux doivent être soigneusement extraits.

  • Préparation des échantillons : Les cerveaux doivent être brièvement fixés dans du formol neutre à 10 %

  • Expédition des échantillons : Les échantillons doivent être expédiés dans du PBS contenant de l'azoture de sodium.

Exemple de coloration et d'analyse de la protéine Tau mIF dans un modèle murin de tauopathie 4R

Exemple de pathologie tau, de neuroinflammation et de neurodégénérescence dans un modèle murin de PSP et de CBD.

Biospective a développé un modèle unique de souris de la Tauopathie 4R, qui inclut un dysfonctionnement dopaminergique et des déficits moteurs. Nous avons largement validé ce modèle en utilisant une large gamme d'essais in vivo et ex vivo, y compris divers biomarqueurs translationnels pour servir de plateforme pour l'évaluation d'agents thérapeutiques. Nous avons tiré parti de notre portefeuille de marqueurs tau et de panels IF multiplex pour caractériser la neuropathologie chez ces souris.

IF multiplex de la coloration de la protéine tau dans le cerveau de la souris

Images représentatives d'immunofluorescence multiplex de la protéine tau neuronale intracellulaire colorée par divers anticorps pour la protéine tau phosphorylée et/ou clivée dans des coupes de tissus cérébraux de souris. La microglie et les astrocytes sont également colorés dans ces images.

Dans notre caractérisation de ce modèle, nous avons trouvé :

  • Des agrégats de tau phosphorylés dans la substantia nigra et le mésencéphale.

  • Des microglies activées et des astrocytes réactifs à proximité des inclusions tau intracellulaires.

  • Perte de neurones dopaminergiques dans la substantia nigra pars compacta.

  • Réduction des terminaux dopaminergiques dans le caudé-putamen.

  • Déficits moteurs mesurés par l'agrippement des membres postérieurs, le test du cylindre, le rotarod, le test de suspension de la queue et les scores SNAP.

  • Atrophie cérébrale régionale à l'IRM dans la substantia nigra, le mésencéphale et le striatum.

  • Concentrations élevées de la chaîne légère des neurofilaments (NfL) dans le plasma.

Présentation interactive de notre étude de recherche
Dans l'"Image Interactive" ci-dessous, vous trouverez les résultats de notre caractérisation complète et multimodale de notre modèle de souris atteinte de tauopathie, y compris des coupes de tissus cérébraux par immunofluorescence multiplex à haute résolution.

Comment utiliser notre visionneuse interactive
Naviguez dans l'"histoire de l'image" à l'aide du panneau de gauche ou des flèches à l'écran. Vous pouvez effectuer un panoramique sur les images de microscopie à haute résolution à l'aide de votre souris et effectuer un zoom avant/arrière en utilisant la molette de défilement ou les commandes +/-. Le panneau de contrôle (en haut à droite) permet de basculer entre les canaux d'images et les superpositions de segmentation. Pour une expérience optimale, nous vous recommandons de passer en mode plein écran. Cette présentation interactive vous permet d'explorer en détail la neuropathologie du modèle et les déficits fonctionnels qui y sont associés, comme si vous regardiez directement au microscope.

Caractérisation d'un nouveau modèle de souris AAV-hTau pour les tauopathies présentant des caractéristiques parkinsoniennes

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Logo de Biospective Preclinical

Les tauopathies, telles que la paralysie supranucléaire progressive et la dégénérescence corticobasale, sont des maladies rares qui présentent des caractéristiques parkinsoniennes importantes, notamment des symptômes moteurs tels que l'instabilité posturale, la paralysie du regard vertical, la rigidité, le ralentissement des mouvements (bradykinésie), les contractions musculaires (dystonie) et les secousses soudaines (myoclonie). En outre, les individus peuvent être confrontés à des difficultés d'élocution et de déglutition, à un déclin cognitif et à une perte de perception sensorielle au niveau cortical. Ces maladies neurodégénératives évoluent souvent rapidement et se caractérisent pathologiquement par des inclusions de tau phosphorylé dans les neurones et les cellules gliales.

Le manque de modèles animaux récapitulant la maladie humaine constitue un problème important pour le développement de thérapies de modification de la maladie pour les tauopathies. Pour résoudre ce problème, Biospective a développé et caractérisé un modèle de souris induit par un vecteur du virus adéno-associé (AAV) qui est bien adapté aux études précliniques d'efficacité thérapeutique pour la paralysie supranucléaire progressive et la dégénérescence corticobasale.

Cette présentation interactive illustre certaines des principales caractéristiques de la fonction motrice, de la neuro-imagerie et de la pathologie du modèle humain AAV de tau de Biospective, qui présente des tauopathies avec des caractéristiques parkinsoniennes.

Ce modèle a été généré en injectant à des souris C57BL/6 âgées de 2 mois des vecteurs AAV-hTau (tau humaine de type sauvage 2N4R) dans la substantia nigra pars compacta (SNc) gauche et des vecteurs AAV-null (contrôle) dans la SNc droite à l'aide d'un appareil stéréotaxique numérique doté d'un micro-injecteur automatisé. Les souris ont été sacrifiées 6 semaines après l'injection.

Atlas coronal avec le site d'injection de l'AAV

Vue de l'atlas coronal du site d'injection du SNc

Les images d'immunofluorescence multiplex (mIF) ont été générées par immunomarquage pour Tau phosphorylée (AT8), Tau conformationnellement altérée (MC1), GFAP, Iba-1, Tyrosine Hydroxylase, Noyaux Dopaminergiques, et contre-coloration avec le colorant nucléaire DAPI. Les coupes de tissus ont été numérisées à l'aide d'un scanner de diapositives à haut débit et traitées à l'aide de la plateforme logicielle PERMITSTM de Biospective.

Pour naviguer dans cette histoire d'images, vous pouvez utiliser les flèches et/ou l'icône de la table des matières dans le coin supérieur droit de ce panneau.

Panneau de navigation avec infobulles

Vous pouvez également interagir à tout moment avec l'image microscopique dans la visionneuse à droite pour explorer davantage ces données à haute résolution.

Pathologie de la tau humaine phosphorylée

Cette image de microscopie montre l'immunomarquage de l'AT8 pour le pTau. Le mésencéphale ipsilatéral (hémisphère gauche) présente une coloration étendue à proximité du SNc et légèrement au-delà. Pour référence anatomique, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau du cerveau est fournie ci-dessous.

Atlas coronal du cerveau au niveau de la Substantia Nigra

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma -3.2) avec étiquettes de neuroanatomie

Pathologie Tau dans les corps cellulaires et les processus neuronaux

Cette image à fort grossissement montre une forte coloration de pTau à la fois dans le soma et les processus des neurones du SNc.

Pathologie de l'altération de la conformation de la protéine Tau

Cette image à faible grossissement montre l'immunomarquage MC1, indiquant la présence de tau conformationnellement modifiée au site d'injection chez les souris ayant reçu une injection d'AAV-Tau. Notamment, l'hémisphère ipsilatéral (gauche) présente une coloration prononcée autour du site d'injection.

Pathologie Tau conformationnellement altérée dans les somas cellulaires et les neurites

Cette image à fort grossissement révèle une forte coloration de MC1 dans le soma cellulaire et les neurites des neurones situés dans le SNc.

Neurodégénérescence dans la Substantia Nigra

Comme on peut le voir sur cette image microscopique, il y a une perte substantielle de neurones dopaminergiques TH-positifs dans le SNc ipsilatéral par rapport à l'hémisphère contralatéral. À titre de référence, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau cérébral est fournie ci-dessous.

Coupe coronale du cerveau au niveau de la Substantia Nigra

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma -3.2) avec étiquettes de neuroanatomie

En utilisant notre logiciel d'analyse quantitative PERMITSTM, nous avons quantifié la coloration TH dans le SNc. Le graphique ci-dessous montre une réduction très significative dans l'hémisphère ipsilatéral des souris AAV-Tau par rapport aux souris AAV-nulles (contrôle).

Densité de la coloration TH pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne SEM, test t, **** p<0,0001.

Atrophie cérébrale dans le SNc et le mésencéphale

L'atrophie régionale du cerveau est une caractéristique essentielle des tauopathies. L'imagerie par résonance magnétique (IRM) est utilisée en clinique pour la neuro-imagerie non invasive de la paralysie supranucléaire progressive (voir notre article) et de la dégénérescence corticobasale (voir notre article). L'équipe de Biospective a étudié le schéma spatio-temporel de l'atrophie cérébrale dans les tauopathies (voir Mesures IRM de la progression de la maladie pour les essais cliniques sur la paralysie supranucléaire progressive et IRM et dégénérescence corticobasale). Nous avons constaté une atrophie significative dans de multiples zones du cerveau, y compris le mésencéphale et le striatum dans les deux maladies.

L'IRM étant un "biomarqueur translationnel", nous avons acquis des images IRM 3D anatomiques in vivo à haute résolution des souris AAV-hTau et AAV-null (contrôle) à l'aide d'un scanner IRM préclinique de 7T. Nous avons effectué un traitement entièrement automatisé des images à l'aide de notre logiciel propriétaire NIGHTWINGTM et avons constaté une atrophie cérébrale très importante dans le SNc et le mésencéphale. Ces données correspondent bien à la perte de neurones TH-positifs observée dans l'image microscopique.

Atlas IRM du cerveau et données de volume pour le niveau SNc

IRM anatomique avec segmentation du SNc et du mésencéphale, ainsi que graphiques de la différence relative entre les hémisphères ipsilatéraux et controlatéraux pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle); SEM moyen, t-test, *** p<0,001 ; **** p<0,0001.

Neurones dopaminergiques dans le SNc controlatéral

Cette image microscopique montre le SNc controlatéral (hémisphère droit) qui présente des corps cellulaires et des processus TH-positifs en rouge. Les noyaux des neurones dopaminergiques sont représentés en bleu.

Perte de neurones dopaminergiques dans le SNc ipsilatéral

Cette image microscopique montre le SNc ipsilatéral (hémisphère gauche) qui présente une réduction profonde des corps cellulaires et des processus TH-positifs (en rouge) par rapport à l'hémisphère controlatéral. Les noyaux des neurones dopaminergiques sont représentés en bleu.

Neurodégénérescence dans le caudé-putamen et déficits moteurs dopaminergiques

Cette image microscopique montre une dénervation dopaminergique sévère du caudé-putamen ipsilatéral (hémisphère gauche) (perte de terminaux TH-positifs). Pour référence, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau cérébral approximatif est fournie ci-dessous.

Section de l'atlas au niveau du striatum

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma +0.86) avec étiquettes de neuroanatomie

En utilisant notre logiciel d'analyse quantitative PERMITSTM, nous avons quantifié la coloration TH dans le Caudé-Putamen. Le graphique ci-dessous montre une réduction hautement significative dans l'hémisphère ipsilatéral.

Coloration de la tyrosine hydroxylase dans le caudé-putamen

Densité de la coloration TH pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne SEM, test t, **** p<0,0001.

Cette perte d'innervation dopaminergique correspond bien aux déficits moteurs unilatéraux chez ces souris, y compris une augmentation hautement significative de l'utilisation de la patte ipsilatérale pendant le test du cylindre, une diminution de la latence à la chute dans le test du rotarod, une augmentation des balancements vers le côté controlatéral dans le test de suspension de la queue (TSST), et une augmentation de la préhension des membres postérieurs (Hindlimb Clasping). En outre, des asymétries sensorimotrices précoces ont été détectées à l'aide du score SNAP, soulignant son utilité en tant que mesure sensible pour le suivi de la progression de la maladie.

Résultats des essais sur les cylindres

Données du test du cylindre pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-nul (contrôle) ; moyenne SEM, test t, **** p<0,0001.

Résultats du test du rotarod

Données du test du rotarod pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-nul (contrôle) ; moyenne SEM, test t, **p<0,01.

Résultats du TSST

Données du TSST (Tail Swing Suspension Test) pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne SEM, t-test, **** p<0,0001.

Résultats du test d'agrippement des membres postérieurs

Données sur l'agrippement des membres postérieurs pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; SEM moyen, test t, **** p<0,0001.

Résultats du test SNAP

Scores SNAP pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-nul (contrôle) au cours des semaines 1, 3 et 5 ; SEM moyen, test t, **p<0,01 ; **** p<0,0001.

Perte de terminaisons dopaminergiques dans le caudé-putamen ipsilatéral

Cette vue à fort grossissement montre l'étendue sévère de la perte des terminaux dopaminergiques (TH positifs) dans le striatum ipsilatéral. Il reste quelques axones (bien que dystrophiques).

Nous avons également identifié une atrophie cérébrale significative dans le caudé-putamen sur les examens IRM, ce qui correspond bien à notre analyse des données IRM humaines des populations atteintes de paralysie supranucléaire progressive et de dégénérescence corticobasale. Ces données confirment la "transposabilité" de ce modèle de tauopathie.

Atlas IRM et données volumiques au niveau du striatum

IRM anatomique avec segmentation du striatum, ainsi que graphique de la différence relative entre le striatum ipsilatéral et le striatum controlatéral. ****p<0.0001.

La déformation localisée de la surface révèle la neurodégénérescence induite par la protéine Tau

En utilisant une nouvelle approche morphométrique basée sur la surface, nous avons validé notre modèle AAV-Tau en identifiant un biomarqueur sensible dérivé de l'IRM pour la neurodégénérescence - des déformations de surface localisées dans le striatum et le mésencéphale qui sont en corrélation avec la perte de neurones dopaminergiques.

Déformation de la surface striatale chez les souris AAV-Tau

rendu de surface en 3D du striatum montrant des régions localisées de déformation vers l'intérieur dans l'hémisphère gauche de souris ayant reçu une injection d'AAV-Tau. Les couleurs froides indiquent des statistiques t négatives statistiquement significatives correspondant à un déplacement vers l'intérieur. La déformation est confinée au côté ipsilatéral, ce qui est cohérent avec l'atrophie induite par la protéine tau.

Corrélation entre la déformation du striatum et la densité de TH

Superposition de la carte de la déformation de la surface du striatum avec la corrélation correspondante de la densité de TH. Les régions de couleur chaude représentent les zones présentant des statistiques t positives significatives, indiquant une forte relation entre la déformation de la surface locale et la densité des marqueurs TH. Ces régions mettent en évidence les zones de dénervation dopaminergique chez les souris AAV-Tau.

Modèles d'atrophie du mésencéphale

Carte de déformation de la surface du mésencéphale chez les souris ayant reçu une injection d'AAV-Tau. Les couleurs froides indiquent les régions présentant une statistique t négative significative, reflétant un déplacement de surface vers l'intérieur (atrophie) localisé dans l'hémisphère gauche. Un modèle de déformation plus étendu dans l'espace a été observé chez les jeunes souris par rapport aux cohortes plus âgées.

Microgliose en réponse à l'expression de la protéine Tau 2N4R chez l'homme

Sur cette image à faible grossissement, on peut facilement apprécier la densité plus élevée de microglies Iba-1 positives dans l'hémisphère ipsilatéral (gauche) (indiqué par le cadre) par rapport à l'hémisphère controlatéral.

Le graphique ci-dessous montre la densité de la coloration Iba-1 dans le SNc.

Diagramme de la coloration de l'Iba-1 chez les souris ayant reçu des injections d'AAV-Null et d'AAV-Tau

Densité de la coloration Iba-1 pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne SEM, test t, **** p<0,0001.

Nous avons effectué une analyse morphologique de la microglie en utilisant une nouvelle approche de vision par ordinateur et d'apprentissage automatique développée par notre équipe. Cet algorithme entièrement automatisé permet de classer les microglies non activées (ramifiées) et activées (non ramifiées).

Image de microglies activées et non activées

Le graphique ci-dessous montre l'activation microgliale dans le SNc, avec une augmentation très significative de l'activation microgliale chez les souris AAV-Tau.

Tracé des données PERMITS montrant une microglie activée dans le SNc

Activation microgliale pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; SEM moyen, test t, **** p<0,0001.

Coloration de l'Iba-1 à proximité de la protéine Tau phosphorylée

Cette vue à fort grossissement montre la densité accrue de microglies marquées à l'Iba-1 dans les zones présentant des agrégats de tau phosphorylés.

Astrogliose et pathologie Tau humaine

Cette image de microscopie à faible grossissement montre une densité plus élevée d'astrocytes GFAP-positifs dans l'hémisphère ipsilatéral (indiqué par l'encadré). Le graphique ci-dessous montre la densité de coloration de la GFAP dans le SNc.

Graphique de la densité de coloration de la GFAP dans le SNc

Densité de la coloration GFAP pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne SEM, test t, **** p<0,0001.

Coloration de la GFAP à proximité de p-Tau

Cette vue à fort grossissement montre la densité accrue des astrocytes colorés par la GFAP dans les zones présentant des agrégats de Tau phosphorylée.

Résumé

Ce nouveau modèle murin de tauopathies présentant des caractéristiques parkinsoniennes récapitule de nombreuses caractéristiques de la paralysie supranucléaire progressive et de la dégénérescence corticobasale, y compris le développement d'un dysfonctionnement moteur asymétrique (dû à l'injection unilatérale) et la perte associée de neurones SNc TH+ et de l'expression striatale de la TH.

L'AAV-hTau entraîne au niveau régional une atrophie cérébrale très importante, une augmentation de la densité microgliale et des niveaux d'activation, une augmentation de la densité et de l'hypertrophie des astrocytes, et l'accumulation de tau pathologique dans le soma des cellules et les neurites. D'autres études sont prévues pour continuer à étudier les changements pathologiques dans ce modèle.

Ce modèle de souris inductible et à évolution rapide est bien adapté à la découverte de médicaments avec des données quantitatives in vivo et ex vivo, et présente des avantages distincts par rapport aux modèles transgéniques existants en tant que méthode de dépistage de nouvelles options thérapeutiques ciblant la pathologie liée à la protéine tau.

N'hésitez pas à explorer davantage l'image microscopique dans la visionneuse.

Nous serions heureux de discuter de ce modèle et de notre caractérisation si vous souhaitez nous contacter.

Table des matières
Panneau de contrôle
Section: SNc Section 1
Canaux

Image interactive illustrant la coloration et l'analyse de la protéine tau, y compris des coupes de tissus cérébraux en immunofluorescence multiplex à haute résolution, provenant de notre modèle de souris 4R atteintes de tauopathie et de souris témoins. Cette présentation met en évidence nos capacités de coloration IF de la protéine tau et d'analyse d'images.

Principaux avantages des services de coloration et d'analyse de la protéine tau de Biospective :

  • Détection de la protéine tau à haute sensibilité

  • Coloration personnalisée d'anticorps/marqueurs

  • Imagerie automatisée à haut débit de la lame entière et analyse des régions neuroanatomiques

  • Caractérisation et quantification de la protéine tau

  • Analyse de la morphologie et du phénotype des cellules gliales

  • Mesures avancées de la neuroinflammation et de l'environnement de la plaque Aβ - très sensibles aux petits changements dans la progression de la maladie

  • Compatibilité inter-espèces (souris, rat)

  • Services complémentaires (par exemple, biomarqueurs liquides mesurés par immunoessais)

Nous contacter CTA

Pour discuter des exigences de votre étude ou demander un devis pour les services de coloration Tau et d'analyse d'images :

FAQ

FAQ

Est-il possible de multiplexer les anticorps anti-tau et les marqueurs d'agrégation protéique sur la même section de tissu ?

Oui. Des colorants tels que la thioflavine S et le pFTAA peuvent être incorporés dans les panels multiplex, à condition que les tissus et les conditions de fixation soient compatibles.la thioflavine S est un marqueur classique de feuillets β-plexes, tandis que le pFTAA est un colorant très sensible qui résout les conformations fibrillaires. Ces colorants complètent les anticorps anti-tau pour fournir une évaluation complète des espèces et des conformations de tau.

Pouvez-vous colorer d'autres protéines mal repliées dans des modèles de co-pathologie ?

Oui. Nous disposons d'une vaste bibliothèque de protocoles de coloration pour les plaques de bêta-amyloïde, l'α-synucléine et le TDP-43. Des exemples de cette coloration multiplex des tissus peuvent être trouvés dans les images microscopiques de notre modèle unique de souris Aβ et tau co-pathologique.

Peut-on utiliser des tissus congelés et FFPE pour la coloration de la protéine tau ?

Oui. Nous traitons régulièrement les tissus FFPE et les tissus congelés. Les conditions de récupération de l'antigène, y compris le HIER, l'acide formique ou la digestion enzymatique, sont optimisées pour chaque anticorps anti-tau et pour la compatibilité multiplex. Nos flux de travail préservent la morphologie des agrégats de tau et les microstructures environnantes sans compromettre la stabilité du fluorophore.

Pouvez-vous compléter la coloration et l'analyse de la protéine tau par des biomarqueurs du LCR et/ou du sang ?

Oui. Nous disposons d'excellentes capacités internes pour les immunodosages, y compris la tau totale et phosphorylée, Aβ1-40, Aβ1-42, la chaîne légère du neurofilament (NfL), les panels de cytokines pro-inflammatoires, la dopamine, etc.

Mots clés

Mots clés

Virus adéno-associé (AAV) : petits virus qui infectent les cellules de l'homme et d'autres primates( souris, rats, etc.). Ils appartiennent au genre Dependoparvovirus et à la famille des Parvoviridae. Ce sont des virus non enveloppés, à réplication défectueuse, dont le génome linéaire d'ADN simple brin est d'environ 4,8 kb. Plusieurs caractéristiques essentielles rendent les AAV intéressants pour la création de vecteurs de transgénèse somatique et de thérapie génique.

Maladie d'Alzheimer : trouble neurodégénératif progressif caractérisé par un déclin cognitif, une perte de mémoire et des changements de comportement. Elle est associée à l'accumulation de plaques de bêta-amyloïde et d'enchevêtrements de tau dans le cerveau, ainsi qu'à la perte de neurones et de synapses dans le cortex cérébral et les régions sous-corticales.

Amyloïde-bêta (Aβ) : peptide dérivé de la protéine précurseur de l'amyloïde (APP) qui peut s'agréger pour former des plaques.

Astrocytes : cellules gliales les plus abondantes du système nerveux central (SNC), elles jouent un rôle essentiel dans le maintien de l'homéostasie cérébrale et le soutien de la fonction neuronale. Ils régulent le flux sanguin, maintiennent la barrière hémato-encéphalique (BHE) et contrôlent l'équilibre des ions et des neurotransmetteurs dans l'environnement extracellulaire. Les astrocytes soutiennent également la transmission synaptique, favorisent la réparation neuronale et sont des acteurs clés du système glymphatique, qui élimine les déchets du cerveau. En réponse à une blessure ou à une maladie, les astrocytes peuvent devenir réactifs, contribuant ainsi à des réponses inflammatoires à la fois protectrices et nocives. La diversité de leurs fonctions les rend essentiels à la santé et au fonctionnement du cerveau dans son ensemble.

Morphométrie des astrocytes : mesures quantitatives de la morphologie des astrocytes, telles que la surface de la cellule, la fraction de la surface du soma, la taille du territoire, le nombre de points de ramification dans le squelette des processus, etc.

Atrophie cérébrale : réduction du volume ou de l'épaisseur du cerveau entier ou de régions du cerveau.

Liquide céphalorachidien (LCR) : ultrafiltrat de plasma contenu dans les ventricules du cerveau et les espaces sous-arachnoïdiens du cerveau et de la moelle épinière.

Dégénérescence corticobasale (DCB) : maladie neurodégénérative rare qui se présente comme un syndrome parkinsonien atypique. La DCB touche le cortex cérébral et les ganglions de la base. La DCB est souvent diagnostiquée à tort comme une PSP en raison de la similitude de leurs symptômes. La PSP et la CBD sont toutes deux considérées comme des tauopathies avec des accumulations anormales de la protéine tau dans le cerveau.

Microglie : un des types de cellules neurogliales présentes dans le cerveau et la moelle épinière. Constituant environ 10 à 15 % de la population cellulaire totale du cerveau, les cellules microgliales fonctionnent comme les principales cellules immunitaires du système nerveux central. Ces cellules sont essentielles au maintien de l'homéostasie, à l'élimination des débris cellulaires et à l'accomplissement de fonctions de soutien essentielles dans le cerveau.

Morphométrie de la microglie : mesures quantitatives de la morphologie de la microglie, telles que la surface des cellules, le périmètre du soma, le nombre de points de ramification dans le squelette des processus, etc.

Neurodégénérescence : processus complexe et multifactoriel entraînant la perte de neurones.

Neuroinflammation: réponse inflammatoire au sein du système nerveux central (SNC), impliquant principalement l'activation de la microglie et des astrocytes. Ce processus peut être déclenché par divers facteurs, notamment les infections, les lésions cérébrales traumatiques, les métabolites toxiques et les maladies auto-immunes.

Neurofilament Light (NfL ; NF-L) : l'une des quatre sous-unités des neurofilaments, qui sont des protéines présentes dans les neurones et qui leur donnent leur structure et leur forme ; le niveau de lumière des neurofilaments dans le sang et le LCR peut servir de marqueur des lésions neuro-axonales.

Paralysie supranucléaire progressive (PSP) : maladie neurodégénérative qui entre dans la catégorie des syndromes parkinsoniens atypiques. La présentation classique de la PSP comprend des symptômes liés à la marche, à l'équilibre, aux mouvements oculaires et à la déglutition. Outre ces symptômes moteurs, des signes non moteurs, tels que des changements de comportement et des dysfonctionnements exécutifs, sont également fréquents. La prévalence de la PSP varie, avec des estimations allant de 1,4 à 8,3 individus pour 100 000(Ichikawa-Escamilla, 2024).

Astrocytes réactifs : terme générique désignant les astrocytes qui adoptent l'un des nombreux états moléculaires possibles en réponse à des conditions pathologiques dans le SNC, dans le cadre de l'"astrogliose réactive". Défini par Escartin et al. (Escartin, 2021) dans une déclaration de consensus.

Microglie réactive : microglie qui répond ou réagit à une condition particulière. Ce nom a été proposé par Paolicelli et al.(Paolicelli, 2022) à la place du terme déconseillé de microglie "activée", soulignant que la microglie peut avoir de nombreux "états réactifs" différents dans la santé et la maladie.

Tau : protéine qui joue un rôle crucial dans le maintien de la stabilité et de la fonction des neurones dans le cerveau. Elle se trouve principalement dans les neurones, où elle stabilise les microtubules, qui font partie du cytosquelette de la cellule. Les microtubules sont essentiels pour maintenir la forme de la cellule, permettre le transport intracellulaire et faciliter la division cellulaire. L'hyperphosphorylation de la protéine tau est évidente dans diverses maladies neurodégénératives, où les molécules anormalement phosphorylées conduisent au détachement de la protéine tau des microtubules. Ces protéines tau détachées peuvent s'agréger pour former des fibrilles insolubles, connues sous le nom d'enchevêtrements neurofibrillaires. Les maladies affectées par l'agrégation de la protéine tau sont appelées tauopathies et comprennent la maladie d'Alzheimer, la paralysie supranucléaire progressive (PSP), la démence frontotemporale (DFT) et la dégénérescence corticobasale (DCB).

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