다중 면역형광 – 조직 염색 및 정량적 영상 분석 서비스

네. 형광 염색의 경우, 특히 근육, 중추신경계(CNS), 그리고 자가형광이 문제가 될 수 있는 인간 조직에서는 수단 블랙 B(Sudan Black B), 트루블랙(TrueBlack), 또는 트루뷰(TrueView) 퀴닝 용액과 같은 퀴너를 일상적으로 적용합니다 . 이러한 단계는 항원성과 형광체 무결성을 유지하면서 신호 대 잡음 비율을크게 향상시킵니다.

네. 조직 및 고정 조건과 호환될 경우, 아밀로이드 및 응집체 특이적 염료를 다중 분석 패널에 포함시킬 수 있습니다. 티오플라빈 S는 일반적으로 β-시트 아밀로이드 검출에 사용되며, pFTAA는 더 높은 감도를 제공하며 단백질 섬유 사이의 구조적 차이를 구분할 수 있습니다. AmyTracker와 같은 다른 응집 염료도 요청 시 포함될 수 있습니다.

표준 워크플로에서는 단일 염색 단계에서 4~5개의 마커와 DAPI를 지원하며, 일반적으로 AF488, AF555, AF647, AF750과 같은 형광체를 사용합니다. 이 염료들은높은 밝기, 우수한 광안정성, 최소한의 스펙트럼 중첩을 제공하도록 선정되었습니다. 우리는 일상적으로 다양한 숙주 종의 1차 항체를 조합하며, 다중 검출 사용을 위해 검증된 항체의 광범위한 포트폴리오를 유지합니다. 적절한 경우 사전 접합된 1차 항체를 추가로 도입하여패널 유연성을 더욱 확장하고 교차 반응성을 줄입니다.

네. 저희는 패널 설계에 대한 완전한 지원을 제공합니다. 이러한 서비스에는 숙주 종에 기반한 항체 선택, 교차 반응성 회피, 적절한 스펙트럼 간격을 가진 형광체 선택 , 모든 표적과 호환되는 항원 회수 조건 정의 등이 포함됩니다 . 패널은 연구 시료에 적용되기 전에 특이성을 보장하기 위해 양성 및 음성 대조군을 통해검증됩니다.

예. 당사는 표준 강도 측정부터 고도로 발전된 영상 분석에 이르는 정량적 분석을 제공합니다. 저희 파이프라인에는 공동 국소화 평가, 세포 및 섬유 분할, 지역별 정량화, 상세한 신경근접합부(NMJ) 형태학적 프로파일링이 포함됩니다. 또한 글리아 및 염증 환경, 미세아교세포 활성화 상태, 세포 간 근접 관계, 주변 구조 내 병리학적 표지자의 공간적 매핑을 포함한 국소 조직 미세환경을 분석합니다. 결과는 프로젝트 요구사항에 따라 원시 데이터, 완전히 처리된 표, 또는 출판 준비 완료된 그림 형태로 제공 가능합니다.

그렇습니다. 많은 프로젝트에서 표준 패널에 포함되지 않은 항체가 필요하며, 저희는 새로운 1차 항체, 희귀 항원 또는 비표준 종에 대한 검증을자주 수행합니다. 맞춤형 분석법은 귀하의 생물학적 질문과 조직 유형에 완전히 맞춰 설계될 수 있으며, 저농도 마커, 구조적 항원결정기 또는 특수한 세포내 표적도 포함됩니다.

예. 모든 항체는 양성 및 음성 대조조직과 생략 대조군을 사용하여 검증을 거칩니다 . 2차 항체는 종간 교차 결합을 피하기 위해 선택되며, 생쥐 조직에서 생쥐 1차 항체를 사용할 경우 내인성 IgG로 인한 배경을 방지하기 위해적절한 생쥐-생쥐 키트와 차단 전략을 사용합니다 . 깨끗하고 대비가 높은 염색을 얻기 위해 필요 시 희석 시리즈 및 신호 최적화를 수행합니다.

우리는 고정 동결 및 FFPE 샘플을 포함한 생쥐, 쥐, 인간 조직을 일상적으로 다룹니다. 저희 워크플로는 근육, 중추신경계(CNS), 말초신경계(PNS), 종양, 오가노이드 등 다양한 조직 유형을 지원합니다. FFPE 샘플의 경우 일반적으로 3µm 두께의 절편을 처리하며, 고정 동결 샘플은 20~40µm의 두꺼운 절편으로 준비하는 경우가 많습니다. 이러한 두꺼운 조직에서는 절편 전체에 걸쳐 깊고 균일한 염색을 달성하기 위해 연장된 항체 배양 및 최적화된 투과화 프로토콜을 적용합니다.

마우스 조직에 대한 마우스 일차 항체는 특수한 처리가 필요합니다. 저희는 전용 M.O.M. 형광 키트, Fc 수용체 차단, 그리고 혈청 또는 IgG 차단 용액(보통 이차 항체 종에 따라 염소 또는 당나귀 혈청) 을 사용합니다 . 이러한 조치들은 배경을 현저히 감소시키고 신호 대 잡음 비율을크게 향상시킵니다.

본사의 이미징은 다중 분석 작업에 최적화된고해상도 자동화 광역 형광 시스템에서 수행됩니다 . 해당 플랫폼은 초점 내 전체 슬라이드 이미징 및 높은 동적 범위 획득을 지원합니다 .

단순히 목표 대상, 조직 유형 및 목표에 대한 간략한 설명과함께 저희 팀에 문의해 주십시오. 상담 일정을 잡고, 패널을 설계하거나 개선하며, 실행 가능성을확인한 후 상세한 견적서와 프로젝트 일정을 준비해 드리겠습니다.

Bull, J. A., Mulholland, E. J., Leedham, S. J., & Byrne, H. M. Extended correlation functions for spatial analysis of multiplex imaging data. Biol. Imaging; 4: e2, 2024; doi: 10.1017/S2633903X24000011

Hickey, J. W., Neumann, E. K., Radtke, A. J., Camarillo, J. M., Beuschel, R. T., Albanese, A., McDonough, E., Hatler, J., Wiblin, A. E., Fisher, J., Croteau, J., Small, E. C., Sood, A., Caprioli, R. M., Angelo, R. M., Nolan, G. P., Chung, K., Hewitt, S. M., Germain, R. N., Spraggins, J. M., … Saka, S. K. Spatial mapping of protein composition and tissue organization: a primer for multiplexed antibody-based imaging. Nat. Methods, 19: 284–295, 2022; doi: 10.1038/s41592-021-01316-y

Park, J., Kim, J., Lewy, T., Rice, C. M., Elemento, O., Rendeiro, A. F., & Mason, C. E. Spatial omics technologies at multimodal and single cell/subcellular level. Genome Biol., 23: 256, 2022; doi: 10.1186/s13059-022-02824-6

알렉사 플루오르 염료(AF488, AF555, AF647, AF750): 단일 슬라이드에서 4색 다중 분석을 가능하게 하는 고광안정성 형광체 세트입니다. 이 염료들은 높은 신호대잡음비, 최소한의 스펙트럼 중첩을 제공하며, 다중 단백질의 정량적 공간 분해능 공위소화 분석을 동시에 수행할 수 있게 합니다.

항원 회수 (HIER, 효소적, 포름산): FFPE 조직에서 항원 결정기(에피토프)를 노출시켜 다중 형광 표지 항체의 고친화성 결합을 가능하게 하는 방법. TDP-43, pTDP-43, Tau, pSyn129, Aβ, MBP, MOG, Olig2, CC1, Iba1 및 GFAP를 포함한 표적에 필수적입니다. 최적화된 항원 회수는 다중 신호 보존을 향상시키고 채널 간 간섭을 최소화합니다.

자동화된 mIF 염색: 다중 코호트 전임상 연구에 최적화된 고처리량 표준화 형광 염색법. 단일 조직 절편에서 다중 표적의 동시 검출을 재현 가능한 신호 강도로 가능하게 하여 순차적 IHC 대비 변동성을 감소시킵니다. 서로 다른 종의 1차 항체를 사용하여 명확한 검출을 가능하게 하며, 종 특이적 형광 2차 항체가 각 1차 항체에 선택적으로 결합하여 정확한 다중 검출을 실현합니다.

공동 국소화 분석: 단일 조직 절편 내 형광 표지 단백질의 공간적 중첩을 정량적으로 측정하는 접근법. 특정 단백질이 특정 세포 유형에 존재하는지 여부 판단, 상대적 단백질 분포 평가, 신경-아교세포 인접성 매핑이 가능합니다. 광범위한 조직 구조보다는 분자 수준의 공동 발생에 초점을 맞춥니다.

DAPI 대조염색: 중추신경계 영역 전반에 걸쳐 자동화된 핵 분할, 세포 식별 및 형태학적 정량화를 위한 mIF에 사용되는 청색 형광 핵 염색제. 다중 채널 형광 이미징에서 조직 구조 및 세포 국소화에 대한 안정적인 기준을 제공합니다.

FFPE 조직 mIF: 표준화된 장기 보존 가능 형식으로, 강력한 다색 형광 염색, 장기적 재현성, 신경퇴행성 질환 코호트의 사후 분석을 가능하게 합니다. mIF는 일반적으로 슬라이드당 단일 표적만 가능한 발색성 IHC와 달리 동일한 조직 절편에서 다중 마커 평가를 허용합니다.

체액-조직 및 영상 상관관계(MRI 포함): mIF를 NF-L, GFAP, Aβ, pTau와 같은 전환형 바이오마커와 통합하고 MRI 기반 측정값(위축, T2*, 확산 텐서 영상, 병변 부하)과 결합합니다. 이 다중 모달 접근법은 세포 병리와 기능적 또는 구조적 영상 종점 간의 공간 분해능 상관관계를 가능하게 합니다.

형광 검출: 1차 항체에 특이적으로 결합하는 형광체 접합 2차 항체를 사용하여 고강도 정량적 신호를 제공합니다. 형광 검출은 저농도 단백질의 검출과 동일한 절편에서 다중 마커의 동시 분석을 가능하게 하여 공간적·형태학적 맥락을 보존합니다.

운동 뉴런 및 NMJ 다중 형광표지자: 포스트시냅스 아세틸콜린 수용체를 위한 ChAT, NeuN, βIII-튜불린, SV2, α-붕가로톡신(BTX) 등 형광 표지자. 세포 내 분해능으로 운동 뉴런, 원위 축삭 및 NMJ 형태를 식별할 수 있어, 기존 IHC로는 달성 불가능한 다중 표지자 공위화 연구 및 시냅스 무결성 상세 매핑을 지원합니다.

다중 면역형광(mIF): 서로 다른 형광체를 사용하여 동일한 조직 절편에서 여러 단백질 표적을 동시에 검출하는 기술. 공간적 관계와 조직 형태를 보존하여 단일 슬라이드 해상도로 세포 공동 발현, 세포 간 상호작용 및 미세환경 조직의 상세한 매핑을 가능하게 합니다.

미엘린 및 축삭 병리학 mIF: MBP, MOG, NF-L, APP, Olig2, CC1 등의 표지자를 서로 다른 형광체에 접합. 동일한 조직 절편에서 탈수초화, 올리고도교세포 계통 상태, 축삭 손상을 동시에 정량화하며 공간적 관계를 보존.

신경퇴행성 병리 mIF 마커: TDP-43, pTDP-43, Tau, pTau, Aβ, pSyn129의 형광 검출. 단백질 응집체의 공위화 연구를 지원하여 중첩 병리 및 뉴런과 신경교세포 내 세포내 분포 평가를 가능하게 합니다.

신경염증 다중 형광면역염색 마커: Iba1, GFAP, CD68, CD3, CD45 등 형광 마커. 단일 슬라이드에서 미세아교세포 활성화, 성상교세포증, 면역 세포 침윤을 평가할 수 있어, 단일 표적 면역조직화학(IHC)에서는 어려운 면역 세포와 뉴런 간의 공간적 관계를 규명합니다.

정량적 다중 형광면역염색(mIF) 영상 분석: 고급 디지털 병리학 파이프라인을 활용한 형광 강도, 단백질 공위화, 세포 밀도, 형태학적 지표 및 공간 분포의 자동 추출. 다중 마커 정량화를 통해 동일 절편 상의 병리학적 과정 직접 비교 가능.

공간적·형태학적 mIF 분석: 조직 구조 및 미세환경 조직의 고해상도 특성화. 아밀로이드 플라크와 같은 병리학적 특징을 둘러싼 신경교 활성화 및 염증 반응을 포함한 다중 세포 구성 요소와 그 공간적 관계를 직접 시각화합니다. 조직 규모에서의 지역적 병리, 세포 군집화, 다세포 상호작용을 강조하여 기존 IHC로는 접근할 수 없는 통찰력을 제공합니다.

치료 효능 mIF 판독: 다중 마커 발현, 공위화, 세포 반응 및 조직 구조 보존에 대한 치료 유발 변화의 정량적 측정. 단일 슬라이드 멀티플렉싱을 통해 신경세포, 신경교세포 및 시냅스 집단 전반에 걸친 미묘한 치료 효과를 공간적·형태학적 맥락을 유지하며 검출합니다.

전체 슬라이드 형광 스캐닝: 전체 조직 절편의 고해상도 다중 채널 이미징. 조직 구조를 보존하면서 다중 형광 마커의 공간적 분포를 포착하여 대규모 코호트 전반에 걸친 세포 및 미세환경 조직의 포괄적 정량 분석과 상세 매핑을 가능하게 합니다.