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separator신경근 접합부(NMJ) – 근육 표본을 위한 조직 염색 및 이미지 분석 서비스

신경근 접합부(NMJ) – 근육 표본을 위한 조직 염색 및 이미지 분석 서비스

바이오스펙티브는 신경근 접합부의 업계 선도적인 염색 기술을 제공하며, 다중 면역형광 및 신경 분포·탈신경화 이미징 분석을 활용합니다.

연락 주세요

이 서비스 살펴보기:

Biospective는 신경근접합부 염색 및 분석을 위해 어떤 서비스를 제공하나요?

신경근접합부(NMJ)는 다음과 같은 다양한 신경계 및 근육 질환에서 영향을 받습니다:

신경근접합부(NMJ)의 신경 분포 및 신경 분절과 같은 NMJ 특징에 대한 정량적 분석은 특히 ALS 병리 및 기타 신경근 질환 모델에서의 NMJ 병리와 관련하여 질병 진행 및 치료적 개입에 대한 반응을 이해하는 데 매우 중요합니다. Biospective의 저희 팀은 근육 조직 절편에서 NMJ의 다중 면역형광 염색 및 정량적 영상 분석을 위한 강력한 방법을 개발했으며, 여기에는 ALS 신경근접합부 연구를 위한 최적화도 포함됩니다.

바이오스펙티브의 신경근접합부(NMJ) 염색 및 분석 프로세스는 무엇인가요?

신경근접합부(NMJ) 염색 및 분석을 위한 당사의 프로세스

바이오스펙티브에서는 포르말린 고정 근육에서 신경근접합부(NMJ)의 염색 및 분석을 위한 표준화되고 재현성이 매우 높은 다단계 공정을 구현하였습니다:

 

1. 조직 절편 제작

  • 근육을 OCT에 포매한 후 동결하여-80°C에서 보관합니다
  • 특수 장비 마이크로톰을 사용하여 고정 동결 조직의 고품질 절편을 생성합니다
  • 절편은 염색 과정중 부착을보장하기 위해고성능 유리 슬라이드에 장착됩니다

2. 조직 절편의 다중 면역형광 신경근접합부(NMJ) 염색

  • 다음에 대한 다중 염색을 수행합니다:
    • 시냅스 전 말단 (SV2A)
    • 운동 말단판 (알파-붕가로톡신)
    • 신경 분포 축삭 (베타-III-튜불린)
  • 일관성과 재현성을 보장하기 위해고처리량 자동 면역조직화학/면역형광 분석 장비를 사용하여 염색을 수행합니다

3. 슬라이드 스캐닝

  • 전체 절편은 디지털 슬라이드 스캐너를 사용하여 초고해상도로 디지털화됩니다
  • 생성된이미지는 시각화 및 정량 분석에 모두 사용됩니다

4. 이미지 분할, 신경근접합부(NMJ) 정량화 및 NMJ 분석

  • 당사의 이미징 과학자들은 시냅스 전 말단(SV2A), 운동 말단판(α-붕가로톡신), 신경 분포 축삭(β-III-튜불린)을 위한 첨단 완전 자동 분할 방법을 개발했습니다.
  • 당사의신경근접합부 분석 도구는 고처리량, 낮은 편향도의 신경근접합부 정량화를가능하게 합니다
  • 분할된 이미지로부터 다양한 정량적 지표를 도출하여NMJ 형태 및 기능적 상태를 특성화합니다

시료 채취, 준비 및 발송 지침

시료 무결성과 데이터 신뢰성을 보장하기 위한 포괄적인 지원을 제공합니다:

  • 시료 채취: 동물은 냉각된 PBS 및/또는 10% 중성 완충 포르말린으로 관류한 후 근육을 신중하게 추출해야 합니다.
  • 시료 전처리: 근육 조직은 10% 중성 완충 포르말린으로 간단히 고정시킨 후 급속 냉동 해야 합니다. 
  • 시료 발송: 시료는 반복적인 동결-해동 주기를 피하기 위해 보온 용기에 드라이 아이스를 넣어 발송해야 합니다 .

신경근접합부 (NMJ)의 주요 구성 요소를 설명하는도식도 . 여기에는 시냅스 전부위 운동뉴런 말단, 시냅스 후부위 운동말단판, 말단 슈반 세포 및 크라노사이트가 포함된다 .  약어: 신경근접합부(NMJ), 아세틸콜린(ACh), 아세틸콜린 수용체(AChR).

신경근 접합부(NMJ)란 무엇인가?

신경근접합부(NMJ)는 운동뉴런과 골격근 섬유 사이의 소통을가능하게 하여 정밀한 근육 수축을 허용하는 특수한 시냅스입니다 . 전기 신호에 반응하여 전시냅스 운동뉴런 말단은 아세틸콜린(ACh)을 방출하며 , 이는 근육막의 운동말단판에 있는 수용체에 결합하여 활동전위를 유발하고 이후 근육 수축을 일으킵니다 .

 

왜 NMJ를 분석하는가?

  • 병리의 초기 부위: 다수의 신경퇴행성 질환에서 운동뉴런 손실보다 먼저 NMJ가 영향을 받습니다(‘사망 후퇴’ 과정).
  • 정량적 평가: 전임상 모델에서 신경절단, 재구성 및 치료 반응 모니터링이 가능하다.
  • 실험적 접근성: 말초 신체 위치로 인해 강력한 영상 및 분석이 가능하여 시냅스 무결성에 대한 고해상도 평가를 용이하게 합니다.

본 영상에서는 신경근접합부(NMJ) 염색 및 분석 서비스의 개요를 제공합니다. 또한 ALS 마우스 모델에서 신경근접합부 탈신경화(denervation)를 보여주는 예시를 포함하여, 당사 서비스가 신경퇴행 측정, 질병 진행 모니터링, 그리고 전임상 연구에서 잠재적 치료법 평가에 어떻게 활용될 수 있는지 시연합니다.

동물 모델에서 신경근접합부(NMJ) 분석의 가치는 무엇인가?

NMJ는 다양한 신경근 질환에서 신경 분포 변화, 형태학적 변화 및 퇴화에 매우 민감하게 반응합니다. 동물 모델에서의 NMJ 분석은 연구자들이 질병 진행을 모니터링하고 전임상 연구에서 실험적 치료제의 효능을 평가할 수 있게 합니다.

검증된 영상 플랫폼, 과학적 전문성 및 풍부한 경험을 바탕으로, 당사는 다양한 모델과 종에 걸쳐 견고하고 재현 가능한 NMJ 정량화를 제공합니다. 여기서는 당사가 신약 치료법 평가에 정기적으로 활용하는 ALS 마우스 모델에서의 NMJ 변화를 중점적으로 소개합니다.

근위축성 측삭 경화증(ALS) 모델 및 ALS 신경근 접합부 병리학

최적의 ALS(또는 운동신경세포질환[MND]) 동물 모델은 다음과 같은 핵심 특징을 나타내야 한다:

  • 인간 ALS/MND와 유사한 증상(운동 기능 장애 및 신경근접합부 취약성 포함)
  • 병리학적 변화를 종단적으로 연구할 수 있는 진행성 질환 경과
  • 질병 진행을 변경하는 중재를 가능하게 하는 질병 수정 효과
  • 전임상 연구를 위한 연령에 적합한 동물의 이용 가능성
  • 동물 간 변이성이 낮아 집단 간 재현 가능한 결과를 보장

TDP-43ΔNLS (rNLS8) 모델

TDP-43ΔNLS (rNLS8) 모델마우스는 이러한 기준을충족하여 ALS 치료제 개발에 매력적인 시스템입니다. 이 모델은 핵 국소화 신호(NLS)가 결손된 인간 TDP-43을 발현하여 핵 내 유입을 방해하고, 신경세포 내 TDP-43의 세포질 축적을 유발합니다 . 시간이 지남에 따라 이 비정상적으로 국소화된 단백질은 인산화된 TDP-43 응집체를 형성하여 ALS 환자에서관찰되는 주요 병리학적 특징을 재현합니다 .

 

Biospective에서는 TDP-43 단백질병증의 rNLS8 ALS 마우스 모델에 대해 원본 및 수정 버전을 모두 활용합니다:

  • 원본 마우스 모델("Off Dox"): 수 주 내에 급속한 질병 진행
  • 바이오스펙티브 마우스 모델("Low Dox"): 수개월에 걸쳐 더 느리고 점진적인 질병 진행  

두모델 모두 다음과 같은 진행성 병리를 나타냅니다:  

  • 운동 뉴런 퇴행 및 국소 뇌 위축
  • 세포질 내 TDP-43 축적 및 인산화 TDP-43 응집체
  • 운동 기능 장애
  • 뇌, 척수 및 신경근 접합부(NMJ) 병리

자세한 내용은 리소스를 참조하십시오:

ALS의 TDP-43ΔNLS (rNLS8) 마우스 모델에서 신경근접합부(NMJ)는 어떻게 영향을 받는가?

바이오스펙티브의 연구 과학자들은 TDP-43 트랜스제닉 마우스 모델에서 신경근접합부(NMJ) 무결성과 탈신경화를 엄격하게 평가했습니다. 본 연구는 모델 유도 8주 후 tTA 대조군 마우스와 "저도크시플루오렌(Low Dox)" rNLS8 마우스를 비교했습니다.

본 연구는 다음을 입증하였습니다:

  • SV2A/α-붕가로톡신 공동 국소화의 현저한 감소, 이는 신경근접합부(NMJ)의 신경절제를 나타냄
  • 총 축삭 투사 감소
  • ALS 유사 시냅스 병리를 반영하는 단순화된 전시냅스 구조

이러한 결과는 신경근접합부에서의 진행성 시냅스 기능 장애를 강조하며, ALS에서 신경근접합부 보존을 목표로 하는 치료적 개입의 전임상 평가를 위한 본 마우스 모델의 활용 가능성을 뒷받침한다.

아래 "이미지 인터랙티브"에서 Biospective의 "Low Dox" TDP-43ΔNLS (rNLS8) 마우스 모델과 대조군 마우스의 근육 조직에 대한 고해상도 다중 면역형광 절편을포함한 NMJ 분석 결과를 확인할 수 있습니다 .

이미지 좌측 마우스 버튼으로 화면 이동이 가능합니다. 마우스/트랙패드(위/아래) 또는 좌측 상단 +/- 버튼으로 확대/축소가 가능합니다. 우측 상단 제어판에서 채널별 표시/숨김, 색상 변경, 이미지 설정 조정이 가능합니다.

최상의 상호작용 경험을 위해 전체 화면 모드 사용을 권장합니다.

TDP-43ΔNLS (rNLS8) ALS 마우스 모델에서의 신경근 접합부 (NMJ) 신경절단

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https://ispproductionpublic.blob.core.windows.net/media/1e7a4868-236a-40a9-9d44-23d2a0c3437e/1e7a4868-236a-40a9-9d44-23d2a0c3437e

저자: Pasquale Esposito, Robin Guay-Lord, Lionel Breuillaud, Kristina DeDuck, 그리고 Barry J. Bedell

근위축성 측삭경화증(ALS)은 운동 뉴런 퇴화를 특징으로 하는 진행성 신경퇴행성 질환으로, 근력 약화, 마비, 그리고 궁극적으로 호흡 부전을 초래한다. 질병 진행 초기에는 운동 뉴런과 골격근 사이의 시냅스 연결인 신경근 접합부(NMJ)가 명백한 뉴런 손실보다 먼저 구조적 및 기능적 변화를 겪는데, 이는 "사망 후퇴(dying-back)" 과정과 진행성 탈신경화를 반영하는 것으로 추정됩니다.

Biospective는 확립된 TDP-43NLS(rNLS8) 마우스 모델의 저용량 독시사이클린("Low Dox") 버전을 구현하여 TDP-43 병리 및 초기 NMJ 손상을 제어 가능하고 점진적으로 유도할 수 있게 했습니다. 이 모델에서는:

  • rNLS8 마우스는 독시사이클린 조절 하에 신경섬유 중쇄(NEFH) 프로모터에서 인간 TDP-43ΔNLS를 발현한다

  • 저용량 독시사이클린(Low Dox) 프로토콜은 수주/수개월에 걸쳐 점진적인 TDP-43 비정상적 국소화 및 응집(인산화된 세포질 내포체 포함)을 유도하여 진행성 신경근접합부 병리를 모사한다

  • 초기 신경근접합부 병리는 인간 ALS에서 가설화된 초기 시냅스 취약성을 반영한다

이 인터랙티브 프레젠테이션은 저도세스(Low Dox) rNLS8 모델에서 신경근접합부(NMJ) 구조적 변화를 강조하며, 다음을 포함합니다:

  • 감소된 시냅스 전 말단

  • 시냅스 정렬 상실

  • 단순화된 축삭 가지치기

rNLS8 마우스는 tetO-hTDP-43ΔNLS 반응자 계통과 NEFH-tTA 드라이버 계통을 교배하여 생성된 이중 유전자, 독시사이클린 조절 모델로, tTA 단독 발현 형제 마우스가 대조군으로 사용되었다. 본 연구에서는 N=13의 저도크시클린 rNLS8 마우스와 N=13의 tTA 대조군 마우스에서 채취한 40µm 두께의 고정 동결 비복근 조직 절편을 사용하여, 시냅스 전(SV2A, βIII-tubulin) 및 시냅스 후(알파-붕가로톡신) NMJ 구성 요소를 표지하고, DAPI를 사용하여 핵을 대조 염색했습니다. 이 (다중 면역형광) 접근법은 탈신경화, 시냅스 정렬 및 축삭 가지치기의 정량적·공간적 분석을 가능하게 하여, 운동 뉴런 손실 이전에 발생하는 미세한 신경근접합부 변화를 포착할 수 있었다.

이 이미지 스토리를 탐색하려면 이 패널의 오른쪽 상단에 있는 화살표 및/또는 목차 아이콘을 사용할 수 있습니다.

https://ispproductionpublic.blob.core.windows.net/media/e4432d9e-0643-4f8b-8af6-5ea0250e5fa8/e4432d9e-0643-4f8b-8af6-5ea0250e5fa8

또한 오른쪽 이미지 뷰어에서 현미경 이미지와 언제든지 상호작용하여 이 고해상도 데이터를 더 자세히 탐색할 수 있습니다.

마우스 비복근에서 신경근접합부 구조 개요

이 고해상도 현미경 이미지는 생쥐 비복근 조직 절편(두께 40 µm)에서 포스트시냅스 아세틸콜린 수용체(AChR)의 α-붕가로톡신(α-BTX) 표지 결과를 보여줍니다. 이 이미지는 근섬유 전체에 걸쳐 신경근접합부(NMJ)의 분포를 강조하며, 각 운동 말단판은 조밀한 α-BTX 양성 영역으로 나타납니다.

PERMITS™ 정량 분석법을 사용하여 비복근 내 α-BTX 밀도를 정량화하였습니다. 아래 그래프는 rNLS8 Low Dox 마우스와 tTA 대조군 마우스 간 유의미한 차이가 없음을 보여주며, 이는 질병 진행의 이 단계에서 전체 신경근접합부 밀도와 공간적 조직화가 유지됨을 시사합니다.

저용량 독소(Low Dox) 마우스와 대조군(Control) 마우스 간 알파-붕가로톡신 염색 농도 차이를 보여주는 그래프

α-BTX tTA 마우스(대조군)와 저용량 독스(Low Dox) rNLS8 마우스의 신호 밀도 비교; 평균 ± SEM. 군간 유의한 차이는 없음.

전신경말단 및 후신경말단 신경근접합부 구성요소의 다중 표지법

이 다중 면역형광(mIF) 이미지는 tTA 대조군 마우스에서 α-BTX(시냅스 후 아세틸콜린 수용체), SV2A(시냅스 전 소포), βIII-튜불린(축삭 투사)을 보여줍니다. tTA 대조군에서는 강한 SV2A-α-BTX 공위화(노란색으로 나타남)가 온전한 신경 분포와 적절한 시냅스 정렬을 나타냅니다. Low Dox rNLS8 마우스에서는 α-BTX 양성 말단판에서 SV2A 신호가 감소하거나 사라져 신경절단이 나타남을 시사합니다. βIII-튜불린 표지 결과 신경접합부(NMJ) 부위에서 축삭 신호가 감소한 것으로 나타나, 접합부에서 축삭 무결성의 조기 손상을 반영합니다.

저희 PERMITS™ 정량 분석을 통해 SV2A–α-BTX 중첩 정도와 시냅스 전 분지 복잡성을 모두 측정했습니다. 아래 그래프는 Low Dox 마우스가 tTA 대조군에 비해 시냅스 전 분지 복잡성이 현저히 감소하고 α-BTX와 SV2A 간 중첩이 감소함을 보여줍니다. 이는 시냅스 무결성 손상과 진행성 신경절제를 반영합니다.

저용량 독소루비린 처리 마우스와 대조군 마우스 간의 신경근접합부(NMJ) 신경 분포 차이 그래프

tTA 마우스(대조군) 대 저용량 독소(Low Dox) rNLS8 마우스에서의 SV2A/α-BTX 중첩률(%); 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001.

저도크스 처리 마우스와 대조군 마우스 간의 시냅스 전 분지 복잡도 차이를 보여주는 그래프

tTA 마우스(대조군) 대 저용량 독스(Low Dox) rNLS8 마우스의 시냅스 전 분지 복잡도; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001.

신경근접합부(NMJ) 분류는 α-BTX 표지와의 SV2A 신호 중첩 비율을 기준으로 수행되었으며, 이러한 범주는 현미경 이미지에서 직접 색상 상자로 시각화될 수 있다. 완전 탈신경 NMJ는 0-20% SV2A/α-BTX 중첩을 보이며, 이는 최소한의 또는 결여된 전시냅스 접촉을 나타낸다. 부분적으로 신경이 분포된 NMJ는 20-80% 중첩을 보이며, 이는 감소되거나 불완전한 시냅스 전부위 커버리지를 반영합니다. 완전히 신경이 분포된 NMJ는 80-100% 중첩으로 분류되며, 이는 온전한 시냅스 정렬과 보존된 시냅스 전부위 연결성을 나타냅니다.

tTA 마우스 비복근 내 완전 신경 분포 신경근접합부

이 고배율 현미경 이미지는 tTA 대조군 마우스의 신경근접합부(NMJ)를 보여줍니다. 완전히 신경 분포된 NMJ가 명확히 관찰되며, 여기서 α-BTX와 SV2A 신호는 정확한 공간적 중첩(노란색)을 보여 완전한 시냅스 커버리지와 온전한 신경전달 구조를 나타냅니다.

PERMITS™ 분석을 통해 완전히 신경 분포된 NMJ의 밀도를 정량화했습니다. 아래 그래프는 Low Dox 마우스가 tTA 대조군에 비해 완전히 신경 분포된 NMJ가 현저히 적음을 보여줍니다.

저용량 독소루비신 처리 마우스와 대조군 마우스 간 완전히 신경 분포된 신경근접합부(NMJ)의 차이를 보여주는 그래프

tTA 마우스(대조군) 대비 Low Dox rNLS8 마우스의 완전 신경 분포 NMJ(α-BTX와 SV2A 간 80–100% 중첩으로 정의) 밀도; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001.

저도크스(Low Dox) rNLS8 마우스 비복근 내 신경절제된 신경근접합부(NMJ)

이 고배율 현미경 이미지는 Low Dox rNLS8 마우스에서 신경이 제거된 신경근접합부(NMJ)를 보여줍니다. 포스트시냅스 아세틸콜린 수용체 클러스터(α-BTX)는 여전히 관찰되지만, 프리시냅스 말단(SV2A)은 현저히 감소하거나 사라져 NMJ의 부분적 및/또는 완전한 신경 제거를 나타냅니다.

PERMITS™ 분석을 통해 부분적 신경분포 및 완전 신경분포가 상실된 NMJ의 밀도를 정량적으로 측정하였습니다. 아래 그래프는 Low Dox 마우스가 tTA 대조군에 비해 부분적 신경분포 및 완전 신경분포가 상실된 NMJ가 유의미하게 더 많음을 보여줍니다.

저용량 독소루비린 처리 마우스와 대조군 마우스 간 완전 탈신경화된 신경근접합부(NMJ)의 차이를 보여주는 그래프

완전 탈신경화 신경근접합부(α-BTX와 SV2A 간 중첩률 0–20%로 정의) 밀도: tTA 마우스(대조군) 대비 저용량 독소(Low Dox) rNLS8 마우스; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001.

저용량 독소루비신 처리 마우스와 대조군 마우스 간 부분적으로 신경 분포된 신경근접합부(NMJ)의 차이를 보여주는 그래프

부분적으로 신경 분포된 신경근접합부(α-BTX와 SV2A 간 20–80% 중첩으로 정의) 밀도: tTA 마우스(대조군) 대비 Low Dox rNLS8 마우스; 평균 ± SEM, t-검정, ** p < 0.01.

저용량 독소루비클린 rNLS8 마우스에서 위복근의 축삭 밀도 감소

이 현미경 이미지는 Low Dox rNLS8 마우스에서 운동 축삭 밀도가 감소한 모습을 보여주며, 이는 명백한 탈신경화 이전에 나타나는 말초 축삭 병리의 초기 징후입니다. βIII-튜불린 및 SV2A 표지 결과, 대조군에 비해 포스트시냅스 말단판으로 투사되는 축삭 분지가 적고, 프리스시냅스 네트워크가 분절되며 말단이 짧아진 것을 확인할 수 있습니다.

PERMITS™ 분석을 통해 총 축삭 투사량을 정량화하였습니다. 아래 그래프는 Low Dox 마우스가 tTA 대조군에 비해 축삭 투사량이 현저히 적음을 보여줍니다.

로우 독스와 대조군 마우스 간의 총 축삭 투사량 차이를 보여주는 그래프

tTA 마우스(대조군)와 Low Dox rNLS8 마우스의 총 축삭 투사 비교; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001.

저용량 독소루비신 처리 마우스와 tTA 대조군 마우스 간 신경근접합부 구조적 변화 검출을 위한 표본 크기 추정

아래 표는 tTA 대조군과 저도세파마우스 간 SV2A–α-BTX 중첩, 시냅스 전 분지 복잡도, 총 축삭 투사 변화 검출을 위한 표본 크기 추정치 요약입니다. 표본 크기는 두 군 각각 N=13 마우스에서 관찰된 효과 변화와 표준편차로부터 추정되었습니다. SV2A–α-BTX 중첩에서 관찰된 군간 차이 25%를 검출하기 위해 필요한 표본 크기는 군당 15마리 미만으로 추정되며, 군간 차이 33% 및 50% 검출에는 각각 군당 10마리 미만 및 5마리 미만이 필요할 것으로 추정됩니다. 

표본 크기 추정치 표

통계적으로 유의한 차이를 검출하기 위한 표본 크기 추정치(마우스 수/군): tTA 마우스(대조군)와 저용량 독스(Low Dox) rNLS8 마우스 간 SV2A–α-BTX 중첩, 시냅스 전 분지 복잡도, 총 축삭 투사량 비교. 녹색 음영은 관찰된 군간 차이를 검출하기 위해 군당 1-15마리의 표본 크기가 필요함을, 연두색 음영은 군당 15-30마리가 필요함을, 노란색 음영은 군당 30-45마리가 필요함을 나타냅니다.

TDP-43NLS 모델에서 신경근 접합부 구조 및 기능에 대한 다중 모달리티 평가

여기서 강조된 신경근접합부(NMJ) 신경분포 및 구조적 변화 외에도, 우리는 비침습적 종단적 생체 내 CT 영상 촬영을 통해 근육 위축을 정량화하고, EMG(근전도)를 통해 근육 전기생리학적 특성을 평가(CMAP 진폭 및 지연 시간 측정)하며, 그립 강도 검사를 통해 근력 약화를 평가하였습니다. 이 모든 방법은 인간 ALS의 임상적으로 중요한 특징들을 반영합니다.

모델 유도 후 10주 동안 저도세탁소마우스와 대조군 마우스 간의 근육 부피 변화를 보여주는 그래프

모델 유도 후 10주 동안 대조군 마우스 대비 저도세탁소마우스의 후지 근육 부피 변화; 평균 ± SEM.

모델 유도 후 10주 시점에서 저도세파마이트 마우스의 CMAP 최대 진폭 차이를 보여주는 그래프

모델 유도 전 기준선 및 모델 유도 10주 후 저도세파마우스에서 측정된 복합근육활동전위(CMAP)의 최대 진폭; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001

모델 유도 후 10주째 저도세파마이드 마우스의 CMAP 최대 진폭 차이 그래프

모델 유도 전 기준선 및 모델 유도 10주 후 저도세파마(Low Dox) 마우스에서 측정된 복합근 활동전위(CMAP)의 최대 진폭; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001

모델 유도 후 10주째 저도세파마이트 마우스의 CMAP 최대 진폭 차이 그래프

모델 유도 전 기준선 및 모델 유도 10주 후 저도세파마우스에서 측정된 복합근육활동전위(CMAP)의 최대 진폭; 평균 ± SEM, t-검정, **** p < 0.0001

요약

이 독시사이클린 조절 TDP-43 마우스 모델(rNLS8)은 명백한 운동 뉴런 손실 이전에 나타나는 부분적 및 완전한 탈신경화 형태의 진행성 신경근접합부(NMJ) 손상, NMJ 부위에서의 축삭 투사 감소 등 초기 ALS 병리의 핵심 특징을 재현합니다.

Biospective의 Low Dox 프로토콜은 몇 주에 걸쳐 점진적인 TDP-43의 비정상적 국소화 및 세포질 응집을 유도하여, tTA 대조군에 비해 측정 가능한 수준의 시냅스 전 분지 및 NMJ 신경 분포 감소를 초래합니다.

자동화된 조직 염색 및 고처리량 이미징 및 분석과 결합된 유도형 rNLS8 TDP-43ΔNLS 모델은 NMJ 및 축삭 병리를 정밀하고 정량적으로 평가할 수 있게 하여, ALS의 초기 시냅스 결손을 표적으로 하는 치료제의 전임상 평가를 위한 이상적인 플랫폼을 제공합니다.

뷰어에서 현미경 이미지를 자유롭게 살펴보시기 바랍니다.

이 ALS 마우스 모델, 그 특성 분석 및 저희의 신경근접합부(NMJ) 분석에 대해 논의하고 싶으시다면 기꺼이 도와드리겠습니다문의하기.

https://ispproductionpublic.blob.core.windows.net/media/1e7a4868-236a-40a9-9d44-23d2a0c3437e/1e7a4868-236a-40a9-9d44-23d2a0c3437e
목차
제어판
Section: tTA Control
세그먼트
채널

이미지 인터랙티브는 Biospective의 "Low Dox" TDP-43ΔNLS (rNLS8) 마우스 모델과 대조군 조직의 고해상도 다중 면역형광 근육 절편을 특징으로 하는 NMJ 분석 결과를 표시합니다.

자동화가 결과를 어떻게 개선하나요?

우리는 첨단 고처리량 이미징 및 정량화 플랫폼을 활용한 자동화된 신경근접합부 염색 및 분석 기술을사용합니다 . 이 접근법은 다양한 샘플과 실험 조건에서 신경근접합부 구조와 완전성에 대한 정확하고 재현성 있는 평가를 보장합니다 .

수동 및 자동 신경근접합부 염색 및 분석 비교

기능

수동

자동화

염색 일관성

항체 배양 시간 변동 및 시약 불균일 분포

정밀하게 제어된 시간, 온도 및 시약 적용

처리량 및 효율성

시간 소모적이고 분석 가능한 슬라이드 수가 제한적

고처리량 염색, 이미징 및 데이터 처리

재현성

염색 및 분석 시 작업자에 따른 변동성

표준화된 프로토콜 및 알고리즘 기반 NMJ 정량화

데이터 정확도 및 정밀도(
) 분석 깊이

주관적인 NMJ 평가; 제한된 정량적 정밀도

자동화된 분할-위치 지정 및 형태학적 분석

형태학적 프로파일링

수동적 NMJ 크기, 형태 및 복잡도 측정

NMJ 면적, 둘레, 분기 및 복잡도 지표의 자동 추출

공간 매핑

선택된 관심 영역(ROI)으로 제한됨

NMJ 분포 및 시냅스 커버리지의 전체 단면 매핑

이 표는 염색 일관성, 처리량 및 효율성, 재현성, 데이터 정확성 및 분석 깊이, 형태학적 프로파일링, 공간 매핑 등 주요 기준에 걸쳐 수동 및 자동 신경근 접합부(NMJ) 염색 및 분석을 비교합니다.

모자이크 배열의 신경근접합부 근육 이미지

마우스 근육에서 자동 염색 및 Biospective에서 개발된 공정을 이용한 이미지 분석을 거친 신경근접합부(NMJ)의 예시 이미지.

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자주 묻는 질문

NMJ란무엇인가 ?

신경근접합부(NMJ)에영향을 미치는 질환 및 상태는 무엇인가요 ?

신경퇴행성 질환에서신경근접합부(NMJ)는 어떻게 영향을 받나요 ?

신경근접합부 형태는 어떻게 연구할수 있나요 ?

신경근접합부를종단적으로연구할 수 있을까요?

신경근접합부 관련 질환연구를위한 보완적 바이오마커는 무엇인가 ?

참고문헌

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