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Modèles de souris AAV-Tau de tauopathies

Injection de vecteurs AAV MAPT humains pour générer des agrégats tau, une neuroinflammation, une neurodégénérescence et une dénervation dopaminergique avec déficits moteurs.

Modèle de tauopathie induite par AAV (AAV-Tau) - Présentation

Pour ce modèle de paralysie supranucléaire progressive et de dégénérescence corticobasale, nous effectuons une inoculation stéréotaxique unilatérale d'AAV surexprimant la protéine tau humaine de type sauvage (MAPT) dans la substance noire de souris C57BL/6 âgées de 2 à 3 mois environ. Ce modèle murin reproduit plusieurs caractéristiques clés des tauopathies humaines, notamment :

  • Réduction des neurones dopaminergiques dans la substance noire pars compacta
  • Dénervation dopaminergique du striatum ipsilatéral
  • Agrégats de protéine tau phosphorylée dans les corps cellulaires et les neurites
  • Microglie activée
  • Astrocytes réactifs
  • Dysfonctionnement moteur
  • Atrophie cérébrale (substantia nigra, mésencéphale, caudé-putamen) mesurée par IRM in vivo

Génération du modèle AAV-Tau

Le schéma général de la génération du modèle est le suivant :

Une installation de chirurgie stéréotaxique avec un rongeur

Pour ce modèle spécifique, nous utilisons des souris C57BL/6 âgées de 8 à 12 semaines. Nous procédons ensuite à une injection stéréotaxique de vecteurs AAV à proximité de la substance noire. Nous utilisons des dispositifs stéréotaxiques numériques avec des micro-injecteurs automatisés pour une grande précision.

Les études utilisant ce modèle peuvent être rapidement lancées. La phase in vivo de l'étude dure généralement environ 6 semaines. Ainsi, les résultats peuvent être fournis dans un délai relativement court, surtout par rapport aux modèles transgéniques tau conventionnels de la maladie d'Alzheimer et des tauopathies.

Nos mesures validées

  • Test de préhension des membres postérieurs
  • Test de suspension par la queue
  • Test du cylindre
  • Test de la tige tournante
  • IRM atrophie cérébrale
  • IHC et immunofluorescence multiplexe

En savoir plus sur la transposabilité de ce modèle aux tauopathies humaine.

 

Coloration par immunofluorescence AT8 dans le SNc injecté
Microglies (orange) + astrocytes (violet)
THSTR B203-TR-L006 RND083S208
TH+LMX1B SN AAVTau
1/4
pause

Coloration par immunofluorescenceAT8 dans le SNc injecté

Double marquagepar immunofluorescenceIba-1 et GFAP dansle SNc injecté

Réductionspectaculairedela coloration de la tyrosine hydroxylase dans l 'hémisphèreipsilatéral

Perte sévère de neurones dopaminergiques dans le SNc injecté

Caractérisation du modèle

La présentation interactive ci-dessous vous permet d'explorer la caractérisation de notre modèle de souris AAV-Tau, y compris les données in vivo et les images haute résolution de coupes de tissus entières obtenues par immunofluorescence multiplex.

Vous pouvez simplement naviguer dans cette "histoire d'images" à l'aide du panneau de gauche.

Vous pouvez effectuer un panoramique sur les images microscopiques à haute résolution en utilisant le bouton gauche de la souris. Vous pouvez effectuer un zoom avant et arrière à l'aide de la souris/du trackpad (haut/bas) ou des boutons + et - situés dans le coin supérieur gauche. Vous pouvez basculer (on/off), changer la couleur et ajuster les paramètres d'image pour les canaux et les segmentations dans le panneau de contrôle situé dans le coin supérieur droit.

Nous vous conseillons d'utiliser le mode plein écran pour une meilleure expérience interactive.

Caractérisation d'un nouveau modèle de souris AAV-hTau pour les tauopathies présentant des caractéristiques parkinsoniennes

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Logo de Biospective Préclinique

Les tauopathies, telles que la paralysie supranucléaire progressive et la dégénérescence corticobasale, sont des maladies rares qui présentent des caractéristiques parkinsoniennes importantes, notamment des symptômes moteurs tels que l'instabilité posturale, la paralysie du regard vertical, la rigidité, le ralentissement des mouvements (bradykinésie), les contractions musculaires (dystonie) et les secousses soudaines (myoclonie). En outre, les individus peuvent être confrontés à des difficultés d'élocution et de déglutition, à un déclin cognitif et à une perte de perception sensorielle au niveau cortical. Ces maladies neurodégénératives évoluent souvent rapidement et se caractérisent pathologiquement par des inclusions de tau phosphorylé dans les neurones et les cellules gliales.

L'absence de modèles animaux récapitulant la maladie humaine constitue un problème important pour le développement de traitements de fond des tauopathies. Pour résoudre ce problème, Biospective a développé et caractérisé un modèle de souris induit par un vecteur du virus adéno-associé (AAV) qui est bien adapté aux études précliniques d'efficacité thérapeutique pour la paralysie supranucléaire progressive et la dégénérescence corticobasale.

Cette présentation interactive illustre certaines des principales caractéristiques de la fonction motrice, de la neuro-imagerie et de la pathologie du modèle humain AAV de tau de Biospective, qui présente des tauopathies avec des caractéristiques parkinsoniennes.

Ce modèle a été créé en injectant à des souris C57BL/6 âgées de 2 mois des vecteurs AAV-hTau (tau humain de type sauvage 2N4R) ou AAV-null (contrôle) unilatéralement dans la substantia nigra pars compacta (SNc) gauche à l'aide d'un appareil stéréotaxique numérique doté d'un micro-injecteur automatisé.

Atlas coronal avec le site d'injection de l'AAV

Vue de l'atlas coronal du site d'injection du SNc

Des images d'immunofluorescence multiplex (mIF) ont été générées par immunomarquage pour Tau phosphorylée (AT8), GFAP, Iba-1, Tyrosine Hydroxylase, Noyaux dopaminergic, et contre-coloration avec le colorant nucléaire DAPI. Les coupes de tissus ont été numérisées à l'aide d'un scanner de diapositives à haut débit et traitées à l'aide de la plateforme logicielle PERMITSTM de Biospective.

Pour naviguer dans cette histoire d'images, vous pouvez utiliser les flèches et/ou l'icône de la table des matières dans le coin supérieur droit de ce panneau.

Panneau de navigation avec infobulles

Vous pouvez également interagir à tout moment avec l'image microscopique dans la visionneuse à droite pour explorer davantage ces données à haute résolution.

Pathologie de la tau humaine phosphorylée

Cette image de microscopie montre l'immunomarquage de l'AT8 pour le pTau. Le mésencéphale ipsilatéral (hémisphère gauche) présente une coloration étendue à proximité du SNc et légèrement au-delà. Pour référence anatomique, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau du cerveau est fournie ci-dessous.

Atlas coronal du cerveau au niveau de la Substantia Nigra

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma -3.2) avec étiquettes de neuroanatomie

Pathologie Tau dans les corps cellulaires et les processus neuronaux

Cette image à fort grossissement montre une forte coloration de pTau à la fois dans le soma et les processus des neurones du SNc.

Neurodégénérescence dans la Substantia Nigra

Comme on peut le voir sur cette image microscopique, il y a une perte substantielle de neurones dopaminergiques TH-positifs dans le SNc ipsilatéral par rapport à l'hémisphère contralatéral. À titre de référence, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau cérébral est fournie ci-dessous.

Coupe coronale du cerveau au niveau de la Substantia Nigra

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma -3.2) avec étiquettes de neuroanatomie

En utilisant notre logiciel d'analyse quantitative PERMITSTM, nous avons quantifié la coloration TH dans le SNc. Le graphique ci-dessous montre une réduction très significative dans l'hémisphère ipsilatéral des souris AAV-Tau par rapport aux souris AAV-nulles (contrôle).

Coloration de la tyrosine hydroxylase dans la substance noire

Densité de la coloration TH pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Atrophie cérébrale dans le SNc et le mésencéphale

L'atrophie régionale du cerveau est une caractéristique essentielle des tauopathies. L'imagerie par résonance magnétique (IRM) est utilisée en clinique pour la neuro-imagerie non invasive de la paralysie supranucléaire progressive (voir notre article) et de la dégénérescence corticobasale (voir notre article). L'équipe de Biospective a étudié le schéma spatio-temporel de l'atrophie cérébrale dans les tauopathies (voir Mesures IRM de l'évolution de la maladie pour les essais cliniques sur la paralysie supranucléaire progressive et IRM et dégénérescence corticobasale). Nous avons constaté une atrophie significative dans de multiples régions du cerveau, y compris le mésencéphale et le striatum dans les deux maladies.

L'IRM étant un "biomarqueur translationnel", nous avons acquis des images IRM 3D anatomiques in vivo à haute résolution des souris AAV-hTau et AAV-null (contrôle) à l'aide d'un scanner IRM préclinique de 7T. Nous avons effectué un traitement entièrement automatisé des images à l'aide de notre logiciel propriétaire NIGHTWINGTM et avons constaté une atrophie cérébrale très significative dans le SNc et le mésencéphale. Ces données correspondent bien à la perte de neurones TH-positifs observée dans l'image microscopique.

Atlas IRM du cerveau et données de volume pour le niveau SNc

IRM anatomique avec segmentation du SNc et du mésencéphale, ainsi que graphiques de la différence relative entre les hémisphères ipsilatéraux et controlatéraux pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, t-test, **** p<0,0001.

Neurones dopaminergiques dans le SNc controlatéral

Cette image microscopique montre le SNc controlatéral (hémisphère droit) qui présente des corps cellulaires et des processus TH-positifs en rouge. Les noyaux des neurones dopaminergiques sont représentés en bleu.

Perte de neurones dopaminergiques dans le SNc ipsilatéral

Cette image microscopique montre le SNc ipsilatéral (hémisphère gauche) qui présente une réduction profonde des corps cellulaires et des processus TH-positifs (en rouge) par rapport à l'hémisphère controlatéral. Les noyaux des neurones dopaminergiques sont représentés en bleu.

Neurodégénérescence dans le caudé-putamen et déficits moteurs dopaminergiques

Cette image de microscopie montre une dénervation dopaminergique sévère du caudé-putamen ipsilatéral (hémisphère gauche) (perte de terminaux TH-positifs). Pour référence, une illustration avec les étiquettes de l'atlas pour ce niveau cérébral approximatif est fournie ci-dessous.

Section de l'atlas au niveau du striatum

Coupe coronale de cerveau de souris (Bregma +0.86) avec étiquettes de neuroanatomie

En utilisant notre logiciel d'analyse quantitative PERMITSTM, nous avons quantifié la coloration TH dans le Caudé-Putamen. Le graphique ci-dessous montre une réduction hautement significative dans l'hémisphère ipsilatéral.

Coloration de la tyrosine hydroxylase dans le caudé-putamen

Densité de la coloration TH pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Cette perte d'innervation dopaminergique correspond bien aux déficits moteurs unilatéraux chez ces souris, y compris une augmentation hautement significative de l'utilisation de la patte ipsilatérale pendant le test du cylindre, une diminution de la latence à la chute dans le test du rotarod, une augmentation des balancements vers le côté controlatéral dans le test de suspension de la queue (TSST), et une augmentation de l'agrippement des membres postérieurs.

Illustration des tests de motricité et des tracés de l'AAV-Tau par rapport à l'AAV-null

Test du cylindre, test du rotarod, test de suspension de la queue (TSST), et données sur l'agrippement des membres postérieurs pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, t-test, **** p<0,0001.

Perte de terminaisons dopaminergiques dans le caudé-putamen ipsilatéral

Cette vue à fort grossissement montre l'étendue sévère de la perte des terminaux dopaminergiques (TH positifs) dans le striatum ipsilatéral. Il reste quelques axones (bien que dystrophiques).

Nous avons également identifié une atrophie cérébrale significative dans le caudé-putamen sur les examens IRM, ce qui correspond bien à notre analyse des données IRM humaines des populations atteintes de paralysie supranucléaire progressive et de dégénérescence corticobasale. Ces données confirment la "transposabilité" de ce modèle de tauopathie.

Atlas IRM et données volumiques au niveau du striatum

IRM anatomique avec segmentation du striatum, ainsi que graphique de la différence relative entre le striatum ipsilatéral et le striatum controlatéral. ****p<0.0001.

Microgliose en réponse à l'expression de la protéine Tau 2N4R chez l'homme

Sur cette image à faible grossissement, on peut facilement apprécier la densité plus élevée de microglies Iba-1 positives dans l'hémisphère ipsilatéral (gauche) (indiqué par l'encadré) par rapport à l'hémisphère controlatéral.

Le graphique ci-dessous montre la densité de la coloration Iba-1 dans le SNc.

Diagramme de la coloration de l'Iba-1 chez les souris ayant reçu des injections d'AAV-Null et d'AAV-Tau.

Densité de la coloration Iba-1 pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, *** p<0,001.

Nous avons effectué une analyse morphologique de la microglie en utilisant une nouvelle approche de vision par ordinateur et d'apprentissage automatique développée par notre équipe. Cet algorithme entièrement automatisé permet de classer les microglies non activées (ramifiées) et activées (non ramifiées).

Image de microglies activées et non activées

Le graphique ci-dessous montre l'activation microgliale dans le SNc, avec une augmentation très significative de l'activation microgliale chez les souris AAV-Tau.

Tracé des données PERMITS montrant une microglie activée dans le SNc

Activation microgliale pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, *** p<0,0001.

Coloration de l'Iba-1 à proximité de la protéine Tau phosphorylée

Cette vue à fort grossissement montre la densité accrue de microglies marquées à l'Iba-1 dans les zones présentant des agrégats de tau phosphorylés.

Astrogliose et pathologie Tau humaine

Cette image de microscopie à faible grossissement montre une densité plus élevée d'astrocytes GFAP-positifs dans l'hémisphère ipsilatéral (indiqué par l'encadré). Le graphique ci-dessous montre la densité de coloration de la GFAP dans le SNc.

Graphique de la densité de coloration de la GFAP dans le SNc

Densité de la coloration GFAP pour les injections d'AAV-Tau par rapport aux injections d'AAV-null (contrôle) ; moyenne ± SEM, test t, **** p<0,0001.

Coloration de la GFAP à proximité de p-Tau

Cette vue à fort grossissement montre la densité accrue des astrocytes marqués par la GFAP dans les zones présentant des agrégats d'α-synucléine phosphorylée.

Résumé

Ce nouveau modèle murin de tauopathies avec des caractéristiques parkinsoniennes récapitule de nombreuses caractéristiques de la paralysie supranucléaire progressive et de la dégénérescence corticobasale, y compris le développement d'un dysfonctionnement moteur asymétrique et (en raison de l'injection unilatérale), et la perte associée de neurones SNc TH+ et de l'expression striatale de la TH.

L'AAV-hTau entraîne au niveau régional une atrophie cérébrale très importante, une augmentation de la densité microgliale et des niveaux d'activation, ainsi qu'une augmentation de la densité et de l'hypertrophie des astrocytes. D'autres études sont prévues pour continuer à étudier les changements pathologiques dans ce modèle.

Ce modèle de souris inductible et à évolution rapide est bien adapté à la découverte de médicaments grâce à des mesures quantitatives in vivo et ex vivo, et présente un avantage certain par rapport aux modèles transgéniques existants en tant que méthode de dépistage de nouvelles options thérapeutiques ciblant la pathologie liée à la protéine tau.

N'hésitez pas à explorer davantage l'image microscopique dans la visionneuse.

Nous serions heureux de discuter de ce modèle et de notre caractérisation si vous souhaitez nous contacter.

Table des matières
Panneau de contrôle
Section: SNc Section 1
Canaux

Découvrez notre caractérisation des modèles murins AAV-Tau, nos mesures validées et nos services CRO en neurosciences précliniques.

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FAQ

L'IRM cérébrale peut-elle être utilisée comme biomarqueur translationnel ?


L'atrophie cérébrale est-elle principalement causée par la protéine tau ou par la protéine bêta-amyloïde ?


Pouvez-vous évaluer quantitativement la dénervation dopaminergique du noyau caudé-putamen dans ce modèle de tauopathie ?


Qu'est-ce que le « test d'oscillation de la suspension arrière » ?


Comment quantifiez-vous les astrocytes « réactifs » dans le modèle AAV-Tau ?


Qu'est-ce qu'un vecteur « adéno-associé » (AAV) ?


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